用二代測序?qū)颖具M行宏病毒組測序有哪些挑戰(zhàn)?二代測序技術(shù)基本流程是核酸純化-文庫構(gòu)建-生物信息學分析。用二代測序?qū)颖具M行宏病毒組測序,每一步都是很大的挑戰(zhàn)。無論是來自腸道還是水體或者土壤,樣本都會伴隨基因組數(shù)倍于病毒的細菌和宿主細胞。為了提高數(shù)據(jù)有效利用率,首先,樣本處理和核酸純化需要有的放矢。文庫構(gòu)建時,由于病毒基因組核酸存在多種可能,建庫成本的把控、文庫保真度、建庫成功率對于生產(chǎn)者和研究者都是極大的挑戰(zhàn)。而生信分析,由于病毒并不像細菌一樣研究透徹,具備龐大的數(shù)據(jù)庫,目前國內(nèi)外的分析水平也是參差不齊。在探普生物進行病毒基因組測序非常簡單。土壤微生物多樣性分析多少錢
介紹宏病毒組分析的常用軟件之前,首先我們來看一下宏病毒組的基本分析流程。這里需要說明的是基于病毒顆粒分離技術(shù)及NGS測序平臺的宏病毒組學研究還處于起步階段,分析功能模塊新的思路和技術(shù)層出不窮,但另一個層面,宏病毒組是宏基因組的一個分支,基本大的分析思路方面與宏基因組還是有著不小的相似之處。歸納一下,宏病毒組主要包括一下幾個方面的分析內(nèi)容:病毒群落結(jié)構(gòu)組成分析;病毒群落功能分析;病毒(特別是噬菌體)宿主預(yù)測;病毒與群落中細菌、古菌等其他微生物之間的互作網(wǎng)絡(luò);基于非數(shù)據(jù)庫比對的新病毒序列的挖掘。宏基因組分析原理宏基因組學是以功能基因篩選和/或測序分析為研究手段。
病原微生物二代測序,也稱宏基因組測序(mNGS)是目前臨床上針對病原較常用的基因測序方法。通過對疑似傳染標本采集提取后(無需培養(yǎng))直接進行高通量測序,利用病原微生物數(shù)據(jù)庫比對和分析后可以獲得疑似致病微生物種屬信息。基于NGS的宏基因組學檢測技術(shù)在2014年被用于臨床傳染患者的病原學診斷。目前,多個省市已經(jīng)將病原微生物二代測序納入醫(yī)保報銷,助力檢測!目前,國家微生物科學數(shù)據(jù)中心數(shù)據(jù)資源總量已超過300TB,數(shù)據(jù)記錄數(shù)超過了40億條。可用于臨床的微生物數(shù)據(jù)庫包括了超過18000條信息。
近年來,隨著測序技術(shù)的發(fā)展,對微生物群(微生物組)的研究逐漸加深,研究熱點越來越多集中于環(huán)境和生物體相互作用的微生物群。加之測序成本降低,分析技術(shù)不斷提升,都使得宏基因組測序技術(shù)得到普遍應(yīng)用。為什么要做宏基因組:宏基因組相對16S來說其物種分辨率會更高,隨著物種測序完成越來越多,數(shù)據(jù)庫更加完善,在腸道菌群方面基本能實現(xiàn)97%以上的菌都能鑒定到種,90%以上到菌株層面。而且可以同時獲得除RNA病毒外的所有物種的分布。此外包括菌基因組CNV等方法的出現(xiàn),可以直接通過大規(guī)模宏基因組測序不僅找到可能的菌,進一步還能鑒定出特定候選基因區(qū)段。全基因組預(yù)測的意義揭示了人類生、老、病和死的奧秘。
在探普生物進行病毒宏基因組測序,樣品具備什么條件才可以獲得比較質(zhì)量的宏基因組分析效果?其他公司對用于測序的樣本的要求較高。而在探普生物進行病毒宏基因組測序,基于探普的專有流程,樣本要求非常低,不要求總量到達微克,探普有專門的收樣標準和送樣流程。為了保證后續(xù)數(shù)據(jù)的有效利用率,需要客戶配合完成合格的取樣步驟和樣本前處理步驟。當然探普也提供適當?shù)臉颖咎幚矸?wù)。核酸性質(zhì)有RNA和DNA之分,核酸鏈還有單雙鏈之分,而核酸本質(zhì)不同和單雙鏈的不同,進行同樣的實驗步驟其效率也不一樣。這些特點決定了宏基因組測序是相對個性化定制化的一類服務(wù),出于對結(jié)果真實性的尊重和保證,需要客戶和銷售人員充分溝通,設(shè)定合理的樣本處理方案。宏基因組測序技術(shù),克服了傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法的技術(shù)限制。宏基因組分析原理
在探普生物進行病毒宏基因組測序,基于探普的專有流程,樣本要求低。土壤微生物多樣性分析多少錢
宏基因組(也稱微生物環(huán)境基因組或元基因組)是1998年提出的新名詞,其定義為“thegenomesofthetotalmicrobiotafoundinnature”,即生境中全部微小生物遺傳物質(zhì)的總和。它包含了可培養(yǎng)的和未可培養(yǎng)的微生物的基因,目前主要指環(huán)境樣品中的細菌和的基因組總和。而所謂宏基因組學(或元基因組學,metagenomics)就是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對象,以功能基因篩選和/或測序分析為研究手段,以微生物多樣性、種群結(jié)構(gòu)、進化關(guān)系、功能活性、相互協(xié)作關(guān)系及與環(huán)境之間的關(guān)系為研究目的的新的微生物研究方法。一般包括從環(huán)境樣品中提取基因組DNA,進行高通量測序分析,或克隆DNA到合適的載體,導入宿主菌體,篩選目的轉(zhuǎn)化子等工作。土壤微生物多樣性分析多少錢