南通泌尿疾病動物模型建模

    pirb在軸突生長錐表達，位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經(jīng)元突起的表達呈點狀分布。文獻表明，pirb表達隨年齡增加，特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉(zhuǎn)基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到***效應(yīng)。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細胞和動物模型。目前對于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉(zhuǎn)染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉(zhuǎn)染在原代細胞和在體的轉(zhuǎn)染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術(shù)建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點，為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經(jīng)系統(tǒng)的作用和機制提供了很好的工具。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動物模型?？梢院喕瘜嶒灢僮骱蜆悠肥占?。南通泌尿疾病動物模型建模

    l型棒10的第二端12露在椎間孔外，有利于調(diào)整插入位置。***端11的長度大于等于第二端12的長度。在本實施例中l(wèi)型棒的材料選擇的是h62黃銅。在另外的實施例中其材料可以是聚乳酸等其他材料，甚至可以用1個u型棒來代替2根l型棒插入腰4椎間孔和腰5椎間孔。u型棒的兩臂均為4mm長。手術(shù)成功標志為：當l型棒或u型棒正確插入，壓迫到背根神經(jīng)節(jié)時，手術(shù)側(cè)的后肢肌肉呈現(xiàn)輕微的暫時性抽搐，且不引起鼠尾擺動。需要根據(jù)大鼠體重選擇l型棒或u型棒的直徑大小：當大鼠體重在200g到不足220g范圍時，采用直徑為；當大鼠體重在220g到不足250g范圍時，采用直徑為；當大鼠體重在250g到不足300g范圍時，采用直徑為；當大鼠體重在300g到350g范圍時，采用直徑為。實施例2、模型的效果檢測本發(fā)明已通過實驗驗證了該模型的效果。通過28天的觀察，確定了實施例1獲得的模型穩(wěn)定且準確的模擬了腰椎間盤突出壓迫神經(jīng)根后的跛行以及疼痛癥狀。圖3顯示了術(shù)后大鼠出現(xiàn)手術(shù)側(cè)(左側(cè))后爪(見a部所示)沒有同其他三只爪一起抓握網(wǎng)架，而是蜷縮著，呈現(xiàn)不敢承重的表現(xiàn)。表1大鼠術(shù)后不同天數(shù)縮足閾值(單位：g)表1顯示了術(shù)后28天內(nèi)11只大鼠雙下肢縮足閾值的具體的均值和標準誤。常州大鼠疾病動物模型建模什么是疾病動物模型建模？

    引起組織壞死，從而導致卵巢功能早衰。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法。本發(fā)明根據(jù)“順鉑可誘導卵巢細胞凋亡，引起組織壞死，從而導致卵巢功能早衰”這一原理，使用不同濃度及不同方法建立了化療性損傷卵巢早衰動物模型，并對比各種方法間的優(yōu)劣性，篩選出順鉑比較好的濃度及給藥時間，為篩選順鉑導致的卵巢早衰動物模型比較好劑量提供了一種操作簡單，成功率高，結(jié)果可靠的實驗方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種利用順鉑建立大鼠卵巢早衰模型的方法：將劑量為按體重一日2～3mg/kg的順鉑施用于大鼠，施用方式為腹腔注射，施用方法：連續(xù)施用7天，末次注射后第15天，得大鼠卵巢早衰模型?；颍簩┝繛榘大w重4～6mg/kg的順鉑施用于大鼠，施用方式為腹腔注射，施用方法：第1天、第8天施用；末次注射后第15天，得大鼠卵巢早衰模型。進一步地，可將順鉑溶于％氯化鈉溶液配置成順鉑注射液，然后注射。所述順鉑，可市場常規(guī)購買得到，比如齊魯制藥公司生產(chǎn)的順鉑。進一步地，注射期間每天稱量大鼠體重，注射后每周稱量2次；末次注射后15天，麻醉取血檢測***水平，取卵巢檢測對比卵巢重量。

    即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機制。通過pirb敲入動物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗證pirb基因敲入效果的測序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的結(jié)果圖。很多自發(fā)性動物模型在研究人類疾病時具有重要的價值。

1、動物模型名稱：FSH聯(lián)合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實驗動物種屬：KM小鼠或NIH小鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：3~4周齡5、實驗動物體重：16~18g6、實驗動物環(huán)境：SPF級 1、實驗方法：注射用重組人促卵泡***（FSH）聯(lián)合注射絨促性素（HCG）誘導。對雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG當天下午約16：00~17：00按雌雄鼠1：1合籠。次日早上檢查雌鼠陰栓情況。2、檢測標準：合籠后次日雌鼠檢查出現(xiàn)陰栓，表明成功構(gòu)建了超排懷孕小鼠模型。必須真正了解研究者感興趣且需要的小鼠疾病模型。青浦區(qū)疾病動物模型建模供應(yīng)商

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    配制成6mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實驗建立大鼠卵巢早衰模型1.實驗儀器及材料：如表1所示。表12.實驗方法：①動物信息：sd大鼠，雌性，6-8周，體重180-220g。普通環(huán)境飼養(yǎng)，滅菌飼料飼養(yǎng)，自由飲水。②分組及給藥劑量：如表2所示。表2③給藥途徑及頻率：腹腔注射；2mg、3mg組連續(xù)注射7天；4mg、6mg組***天、第八天注射；對照組連續(xù)7天注射生理鹽水。④病理檢測：末次注射后15天，動物麻醉，采集血液，分離血清，elisa法測定血清中e2、fsh、lh水平變化情況。解剖動物，取卵巢組織稱重，對大鼠的卵巢組織形態(tài)學進行觀察。注射期間每天稱重，給藥后每周稱重兩次，每天進行陰道涂片檢測動情周期。3.統(tǒng)計方法：采用graphpad進行統(tǒng)計分析。所有計量資料均采用均值±標準差表示采用單因素方差分析各組間均值的差異，p＜。4.試驗結(jié)果：(3mg組注射完成后*存活一只，不進行統(tǒng)計)如表3、表4、圖1、圖2、圖3所示：①***水平：與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組e2水平均降低，但是只有2mg組有明顯降低(p＜)，如圖1所示；與空白組相比，2mg組、4mg組、6mg組fsh水平均上升，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖2所示；與空白組相比。南通泌尿疾病動物模型建模

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