閔行區(qū)非酒肝疾病動(dòng)物模型建模

建立一種理想的腰椎間盤突出的動(dòng)物模型對(duì)本病的機(jī)制研究和臨床防治具有重要意義。現(xiàn)有模型對(duì)腰椎間盤突出癥的模擬均存在明顯不足，或與臨床實(shí)際病變部位有一定差距，如慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型；或操作難度大，對(duì)動(dòng)物損傷重，如自體髓核移植模型，選擇性神經(jīng)根結(jié)扎模型。因此，急需一種新的操作簡(jiǎn)單，重復(fù)率高，穩(wěn)定且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動(dòng)物模型。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了建立一種操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定好且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動(dòng)物模型，本發(fā)明提供了一種大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的制備方法。其包括以下步驟：步驟一、麻醉大鼠；步驟二、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)或右側(cè)作縱行切口，切開皮膚，鈍性分離椎旁肌，暴露腰4椎間孔和腰5椎間孔；步驟三、將壓迫元件插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。其中，步驟一具體為：腹腔注射1％戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠后，將大鼠背部剃毛，碘伏消毒背部皮膚，俯臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，鋪無菌巾。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，壓迫元件為l型棒；步驟三具體為：將2根l型棒的***端分別插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，l型棒的第二端置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。明確研究疾病的獨(dú)特資源確定小鼠疾病模型的初步選擇。閔行區(qū)非酒肝疾病動(dòng)物模型建模

是從側(cè)面展示的壓迫元件插入椎間孔的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3是術(shù)后大鼠四肢表現(xiàn)情況。圖4是術(shù)后28天大鼠的雙下肢縮足閾值變化曲線圖。圖5是重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)大鼠背根神經(jīng)壓迫模型的影響。具體實(shí)施方式以下通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的描述。以下的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1、模型的制備1、腹腔注射1％戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠(220-250g)，背部剃毛，碘伏消毒背部皮膚，俯臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，鋪無菌巾。2、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)作一2-3cm縱行切口，切開皮膚，鈍性分離椎旁肌至橫突上方，暴露腰4椎間孔，腰5椎間孔(椎旁肌可用自制拉鉤保持分離狀態(tài))。3、將2根***端11為4mm，第二端12為2mm，直徑為，第二端12置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。如圖1和2所示，可以看到腰4錐體1、腰5錐體2、腰6錐體3、l型棒10、腰4神經(jīng)根4和腰5神經(jīng)根5的位置關(guān)系。當(dāng)l型棒10的***端11插入腰4錐體1的腰4椎間孔后，會(huì)對(duì)腰4神經(jīng)根4起到壓迫作用；同樣的，當(dāng)l型棒10的***端11插入腰5錐體2的腰5椎間孔后，會(huì)對(duì)腰5神經(jīng)根5起到壓迫作用。從而達(dá)到模擬腰椎間盤突出壓迫神經(jīng)根的目的，制備得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型~楊浦區(qū)泌尿疾病動(dòng)物模型建模如何定義好的小鼠疾病模型？

f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標(biāo)片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內(nèi)切酶bamhi和avrii對(duì)dna進(jìn)行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉(zhuǎn)到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進(jìn)行雜交，nbt/bcip化學(xué)顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結(jié)果如圖6所示，可以看到：6、8、9號(hào)pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動(dòng)物模型。將本發(fā)明獲得的動(dòng)物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細(xì)胞特異性cre表達(dá)的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實(shí)現(xiàn)在不同組織或者細(xì)胞類型中敲入pirb基因。對(duì)f3代小鼠進(jìn)行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(gè)(pirb-chet)或者兩個(gè)。

大鼠卵巢重量統(tǒng)計(jì)示意圖。圖6：動(dòng)情周期檢測(cè)(光鏡下10倍)示意圖，其中，a、b、c、d依次為：動(dòng)情前期，動(dòng)情期，動(dòng)情后期，動(dòng)情間期。圖7：he染色觀察不同方法造模對(duì)卵泡形態(tài)的影響(光鏡下10倍)示意圖，其中，a、b、c、d依次為：空白組，2mg組，4mg組，6mg組。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。然而，本發(fā)明的范圍并不限于下述實(shí)施例。本領(lǐng)域的專業(yè)人員能夠理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的前提下。進(jìn)一步地，壓迫元件采用不受磁場(chǎng)干擾、置入體內(nèi)不會(huì)對(duì)神經(jīng)造成化學(xué)刺激以及具有一定可塑性的材料制備而成。可以克服人類某些疾病潛伏期長，病程長和發(fā)病率低的缺點(diǎn)。

來源：ZSCI基礎(chǔ)研究中如果加入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分則使得研究更加趨于完善，投稿時(shí)中稿率也相應(yīng)會(huì)增加。但將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)做好卻不是一件容易的事情。這篇文章主要講動(dòng)物模型的構(gòu)建技術(shù)，把骨科、糖尿病相關(guān)的動(dòng)物模型構(gòu)建做了一個(gè)***的技術(shù)匯總，建議先碼后讀，文章內(nèi)容有部分做了簡(jiǎn)化，想看詳細(xì)講解可以在文末獲取課件！一、骨科相關(guān)動(dòng)物模型1.骨關(guān)節(jié)炎1）骨關(guān)節(jié)炎模型構(gòu)建方法（誘發(fā)性）-關(guān)節(jié)腔內(nèi)手術(shù)法、關(guān)節(jié)腔注射法。2）模型評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)①SafraninO染色與OARSI評(píng)分（PMID：31046827、30942801）②HE染色與OARSI評(píng)分（PMID：30609097）③SafraninO染色與Mankin評(píng)分（PMID：30609097）2.骨質(zhì)疏松癥1）骨關(guān)節(jié)炎模型構(gòu)建方法去趨法模型PMID：31037128實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下進(jìn)行雙側(cè)卵巢切除術(shù)以誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥，同時(shí)對(duì)照組小鼠*進(jìn)行卵巢外置但未切除。2）模型檢測(cè)指標(biāo)(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)3.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病狀態(tài)，其特征是滑膜增生，軟骨退化和脊椎關(guān)節(jié)的骨侵蝕4.強(qiáng)直性脊柱炎1）強(qiáng)直性脊柱炎模型構(gòu)建方法2）模型檢測(cè)指標(biāo)。避免了在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的風(fēng)險(xiǎn)。宿遷咨詢疾病動(dòng)物模型建模

便于研究者按實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰S時(shí)采取各種樣品。閔行區(qū)非酒肝疾病動(dòng)物模型建模

可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的，但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。下述實(shí)施例中所涉及的儀器、試劑、材料等，若無特別說明，均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)儀器、試劑、材料等，可通過正規(guī)商業(yè)途徑獲得。下述實(shí)施例中所涉及的實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)方法等，若無特別說明，均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)方法等。實(shí)施例1：建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液50ml加入規(guī)格為10mg的醫(yī)用順鉑(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中，配制成2mg/kg順鉑注射液，按照10ml/kg連續(xù)腹腔注射7天。實(shí)施例2：建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中，配制成3mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg連續(xù)腹腔注射7天。實(shí)施例3建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液25ml加入規(guī)格為10mg的醫(yī)用順鉑(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中，配制成4mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實(shí)施例4：建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下：將％氯化鈉溶液(齊魯制藥，批號(hào)：aa1a8029a)中。閔行區(qū)非酒肝疾病動(dòng)物模型建模

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