注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種高分子化學(xué)類轉(zhuǎn)染試劑。MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!不同分子量PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀是為什么?
方法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。PEI轉(zhuǎn)染試劑是否有毒性?
Polysciences是一家化學(xué)品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后,開拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開發(fā)染料和染色劑,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作,開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應(yīng)用,并不斷開發(fā)和增強其性能。近期業(yè)務(wù)擴展到電子產(chǎn)品,Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術(shù)應(yīng)用中測量精度。公司秉承為應(yīng)用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。PolysciencesInc.致力于提供先進的技術(shù)、制造能力和技術(shù)支持,幫助客戶實現(xiàn)他們的目標(biāo)。細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學(xué)實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑中國區(qū)代理是哪家公司?不同分子量PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法
哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比更高?MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑
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