低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化方案

1、對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。

2、對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

3、即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。 PEI轉染試劑會不會產生毒性？低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化方案

隨后，開拓了在病理（組織研究）應用產品，使組織除了石蠟包埋外，還能夠包埋在塑料塊中；開發(fā)染料和染色劑，以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作，開發(fā)了用于診斷試劑盒應的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作，開發(fā)天然產物分離和純化產品，并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠，用于DNA、蛋白質和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產品在醫(yī)療器械中有許多應用，并不斷開發(fā)和增強其性能。近期業(yè)務擴展到電子產品，Polysciences的精密微粒子產品拓展了納米技術應用中測量精度。公司秉承為應用而研發(fā)，目前已擁有超過3000種產品。上海曼博生物為Polysciences官方授權du jia代理商，更多產品信息，歡迎咨詢！CHO細胞PEI轉染試劑哪個品牌好Polysciences PEI轉染試劑不含動物源成分。

注意事項質粒質量：請務必使用高質量轉染級無內質粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內質粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。近期還有PEIfree申請活動，歡迎咨詢上海曼博生物！

化學轉染方法是生物醫(yī)學研究中常用的轉染方法，主要包括兩類：陽離子脂質體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。一方面使復合體整體帶上正電荷（多數(shù)細胞膜表面帶有弱的負電荷，通過電荷作用吸引復合體到細胞膜表面）；另一方面對線性的核酸進行濃縮，使其體積變小更易穿透細胞膜。陽離子聚合物類轉染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉染試劑的詳細方法，到現(xiàn)在被越來越多的實驗室采用。更多關于Polysciences PEI相關產品內容歡迎咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司！如何辨別假的PEI轉染試劑。

對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產的化合物產品，每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩(wěn)定且品質高,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態(tài)，細胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產品純度，分子量及重量缺失破損等相關投訴，針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們能友善解決。更多關于PEI轉染試劑相關產品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉染對復合物孵化的時間是有要求的，一般建議5-20分鐘之間。PolysciencesPEI轉染試劑使用說明

哪個品牌的PEI轉染試劑比較好？低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化方案

接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。低毒性PEI轉染試劑優(yōu)化方案

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