Glutathione S-Transferase

來源: 發(fā)布時間:2024-09-21

重組增強型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點和應(yīng)用:1.**高熒光強度**:EGFP比野生型GFP具有更強的熒光,這使得它在成像和檢測時更為敏感和有效。2.**改進的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報告基因用于基因表達分析,也可以作為融合標簽用于蛋白質(zhì)定位和動態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學和分子生物學實驗。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長時間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個氨基酸構(gòu)成。在泛素化過程中,首先泛素激起酶E1(Uba1或其他)在ATP的存在下激起泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Glutathione S-Transferase

Glutathione S-Transferase,標準物質(zhì)

IdeSProtease是一種免疫球蛋白G(IgG)特異性降解酶,它能夠在IgG的鉸鏈區(qū)下方的一個特定位點進行切割,產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段。這種酶是通過大腸桿菌(E.coli)表達系統(tǒng)重組表達生產(chǎn)的,并且經(jīng)過分子改造,使其具有更高的酶活和更廣的底物特異性。在生產(chǎn)過程中,確保IdeSProtease符合GMP(良好生產(chǎn)規(guī)范)標準,需要進行以下步驟:1.**分子改造**:通過分子生物學技術(shù)對IdeS進行改造,增強其穩(wěn)定性和比活性。2.**大腸桿菌表達系統(tǒng)**:利用大腸桿菌表達系統(tǒng)進行IdeS的重組表達,確保無動物源性成分,減少病毒污染風險。3.**純化**:通過高度純化過程,確保IdeS的純度達到≥95%。4.**酶活定義**:1個酶活力單位定義為在37°C條件下,30分鐘內(nèi)酶切1μg重組單克隆IgG所需的酶量。5.**質(zhì)量控制**:每批產(chǎn)品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,以確保產(chǎn)品批間穩(wěn)定性和高穩(wěn)定性。6.**儲存條件**:采用適當?shù)膬Υ鏃l件,如-30℃至-10℃凍存,確保產(chǎn)品在有效期內(nèi)保持活性和穩(wěn)定性。7.**微生物學安全性檢測**:進行無菌檢測、體內(nèi)有毒物質(zhì)的檢測、抗生物質(zhì)殘留檢測、宿主細胞蛋白殘留檢測和病毒安全性檢測,確保產(chǎn)品符合微生物學安全性要求。

Hepatitis B Virus Core (128-140)Pfu DNA Polymerase的熱穩(wěn)定性和保真性使其在優(yōu)化PCR條件時更為靈活,比如在GC含量較高的模板中。

Glutathione S-Transferase,標準物質(zhì)

NLS-Cas9Nuclease是一種重組的化膿性鏈球菌Cas9蛋白,它在N端和C端都添加了核定位信號(NLS),這使得它能夠更有效地進入細胞核并進行基因組編輯。這種蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導RNA(gRNA)形成穩(wěn)定的核糖核的蛋白(RNP)復(fù)合物,可以在進入細胞后立即定位到細胞核,從而誘導特定的DNA雙鏈斷裂,實現(xiàn)基因編輯。與傳統(tǒng)的mRNA或質(zhì)粒系統(tǒng)相比,使用NLS-Cas9Nuclease不需要轉(zhuǎn)錄和翻譯過程,因此可以避免將外源DNA插入基因組的風險,這對于基因編輯尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特點包括:1.無DNA:系統(tǒng)不添加外部DNA,降低了插入外源DNA的風險。2.高切割效率:雙NLS確保Cas9蛋白高效進入細胞核。3.低脫靶效應(yīng):Cas9核酸酶的瞬時表達提高了切割的特異性。4.節(jié)省時間:無需轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。這種核酸酶可以用于體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA,以及通過電穿孔或注射與特定gRNA結(jié)合時的體內(nèi)基因編輯。產(chǎn)品的保存條件通常是在-25~-15℃,有效期為一年。使用時,可以根據(jù)推薦的反應(yīng)體系進行體外DNA裂解實驗,并通過瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效率。具體產(chǎn)品的詳細信息和應(yīng)用指南,可以參考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的資料。

高保真Cas9變體在實際應(yīng)用中的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下幾個方面:1.**降低脫靶效應(yīng)**:高保真Cas9變體通過減少與非目標DNA序列的結(jié)合,從而降低了基因編輯過程中的脫靶風險。這對于減少基因編輯可能帶來的非預(yù)期效果至關(guān)重要。2.**提高特異性**:通過工程化改造,如SpCas9-HF1、eSpCas9和HypaCas9等變體,通過在DNA相互作用位點引入突變,減少了對目標DNA的非特異性識別和切割。3.**擴展PAM序列兼容性**:一些高保真Cas9變體,如xCas93.7,能夠識別多種PAM序列,從而擴展了可編輯基因組區(qū)域的范圍。4.**提高效果**:在臨床中,高保真Cas9變體可以減少由于脫靶效應(yīng)引起的潛在風險,提高基因的安全性和有效性。然而,高保真Cas9變體也存在一些局限性:1.**編輯效率可能降低**:在提高特異性的同時,可能會一定的編輯效率。一些高保真變體可能在保持特異性的同時,編輯效率有所下降。2.**結(jié)構(gòu)和功能復(fù)雜性**:高保真Cas9變體的結(jié)構(gòu)改造可能增加其結(jié)構(gòu)和功能的復(fù)雜性,這可能對實際應(yīng)用中的穩(wěn)定性和可預(yù)測性帶來挑戰(zhàn)。3.**成本和可用性**:開發(fā)和生產(chǎn)高保真Cas9變體可能需要更多的研究和資源投入,這可能影響其在某些應(yīng)用中的成本效益。Multiplex Probe qPCR Mix 已預(yù)混了低濃度ROX參比染料,適用于需要低濃度ROX校正的熒光定量PCR儀 。

Glutathione S-Transferase,標準物質(zhì)

EndoS,即糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學研究中有著重要應(yīng)用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點:1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進行切割。2.**應(yīng)用**:在制備糖鏈定點ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點,提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**:EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物,實現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求,可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒有活性。5.**產(chǎn)品形式**:EndoS通常以帶有His標簽的形式存在,便于從反應(yīng)中去除,這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時。

激發(fā)的泛素被轉(zhuǎn)移到泛素結(jié)合酶E2的活性位點半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。Recombinant Human IL-20

Pfu DNA Polymerase 具有3'-5'外切酶活性,能夠識別并切除錯配的核苷酸,進一步提高擴增的準確性。Glutathione S-Transferase

NLS-Cas9-EGFPNuclease在基因編輯中提高特異性的策略包括:1.**核定位信號(NLS)**:NLS有助于Cas9蛋白快速定位到細胞核,這可以減少Cas9在細胞質(zhì)中的非特異性結(jié)合,從而降低脫靶效應(yīng)。2.**瞬時表達**:由于NLS-Cas9-EGFPNuclease是作為蛋白質(zhì)直接遞送的,它在細胞內(nèi)不會經(jīng)歷長時間的表達,這限制了Cas9的活性時間窗口,減少了長時間存在導致的脫靶風險。3.**優(yōu)化gRNA設(shè)計**:精心設(shè)計的gRNA可以提高特異性,通過選擇與目標基因特異性匹配的gRNA,可以減少Cas9在非目標位點的切割。4.**使用高保真Cas9變體**:一些Cas9變體被設(shè)計為具有更高的特異性,通過突變Cas9蛋白的某些氨基酸,可以降低其在非目標位點的活性。5.**熒光標記(EGFP)**:EGFP標簽不僅用于追蹤和分選,還可以幫助研究者通過熒光激起細胞分選(FACS)富集成功編輯的細胞,從而提高編輯特異性。6.**體外驗證**:在實際進行體內(nèi)基因編輯之前,可以通過體外DNA切割實驗驗證gRNA的特異性和效率,篩選出比較好的gRNA。7.**使用PAM序列優(yōu)化**:通過選擇具有限制性PAM序列的gRNA,可以減少可能的脫靶位點。

Glutathione S-Transferase