重組酶是一類(lèi)能夠促進(jìn)DNA分子之間同源或非同源序列的重組的酶。它們?cè)诜肿由飳W(xué)、遺傳工程和細(xì)胞生物學(xué)中扮演著重要角色。重組酶的作用機(jī)制通常涉及識(shí)別特定的DNA序列,催化DNA鏈的斷裂和重新連接,從而實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重組。重組酶的主要類(lèi)型和功能包括:1.限制性內(nèi)切酶**(RestrictionEnzymes):這些酶可以識(shí)別特定的DNA序列并在這些序列處切割DNA鏈。它們是基因工程中常用的工具,用于DNA片段的精確切割和克隆。2.連接酶(Ligases):連接酶可以將兩個(gè)DNA片段連接在一起,形成穩(wěn)定的DNA分子。在DNA克隆和修復(fù)過(guò)程中,連接酶用于封閉切割位點(diǎn)產(chǎn)生的缺口。3.整合酶(Integrases):整合酶能夠?qū)⒁欢蜠NA序列插入到宿主基因組的特定位置。它們?cè)诨蚝瓦z傳工程中具有應(yīng)用。4.轉(zhuǎn)座酶(Transposase):轉(zhuǎn)座酶可以催化DNA片段從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置,這種機(jī)制在基因組中存在,并且在遺傳多樣性和進(jìn)化中起著作用。5.**重組酶**(Recombinases):如RecA蛋白和Rad51蛋白,它們?cè)谕粗亟M中發(fā)揮作用,促進(jìn)DNA雙鏈斷裂的修復(fù)和遺傳物質(zhì)的重組。6.DNA聚合酶:這類(lèi)酶在DNA復(fù)制和修復(fù)中添加新的核苷酸,以現(xiàn)有DNA鏈為模板合成新的DNA鏈。
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過(guò)改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn):1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門(mén)n5轉(zhuǎn)座酶,能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù)、高通量測(cè)序建庫(kù)、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。5.**操作簡(jiǎn)便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,從細(xì)胞到二代測(cè)序文庫(kù)的轉(zhuǎn)化過(guò)程需9小時(shí)。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低。Recombinant Mouse EPHA3 Protein,His Tag在一項(xiàng)研究中,比較了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑馬魚(yú)基因組編輯中的效率。
dGTPSolution(脫氧鳥(niǎo)苷三磷酸溶液)在分子克隆中扮演著重要角色,主要應(yīng)用包括但不限于以下幾個(gè)方面:1.**DNA合成**:dGTP作為DNA聚合酶的底物之一,在分子克隆中用于合成新的DNA鏈,特別是在PCR擴(kuò)增和cDNA合成中。2.**PCR擴(kuò)增**:在常規(guī)PCR和高保真PCR中,dGTP提供必要的核苷酸,以確保目標(biāo)DNA片段的準(zhǔn)確復(fù)制。3.**cDNA合成**:在從mRNA模板合成cDNA的過(guò)程中,dGTP是合成互補(bǔ)DNA鏈的關(guān)鍵成分。4.**DNA測(cè)序**:dGTP也用于Sanger測(cè)序等DNA測(cè)序技術(shù)中,幫助合成測(cè)序反應(yīng)中的DNA鏈。5.**質(zhì)粒構(gòu)建**:在質(zhì)粒或其他載體的構(gòu)建過(guò)程中,dGTP可能用于填補(bǔ)缺口或連接DNA片段。6.**引物延伸**:在引物延伸反應(yīng)中,dGTP用于延伸引物,以合成完整的DNA鏈。7.**DNA標(biāo)記**:dGTP可以用于DNA片段的標(biāo)記,便于后續(xù)的克隆和檢測(cè)。dGTPSolution通常以100mM的濃度提供,以便于在實(shí)驗(yàn)中根據(jù)需要進(jìn)行稀釋。在使用時(shí),應(yīng)確保產(chǎn)品具有高純度、無(wú)DNase和RNase污染,以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。此外,dGTPSolution應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C的條件下,避免反復(fù)凍融,以保持其穩(wěn)定性。
Benzonase核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒的組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化,以確保高靈敏度、高重復(fù)性和高準(zhǔn)確性的檢測(cè)結(jié)果。以下是該試劑盒優(yōu)化的組分:1.**2×BenzDetectionSolution**:這是檢測(cè)中的關(guān)鍵組分,用于提供反應(yīng)所需的緩沖環(huán)境,規(guī)格為1mL。2.**標(biāo)準(zhǔn)品**:試劑盒中包含多個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,包括25ng/ml、12.5ng/ml、6.3ng/ml、3.1ng/ml和1.5ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品,各100μL。這些標(biāo)準(zhǔn)品用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而準(zhǔn)確計(jì)算出樣品中的Benzonase殘留量。3.**樣品稀釋液**:提供1.5mL的樣品稀釋液,用于適當(dāng)稀釋待檢測(cè)樣品,以適應(yīng)檢測(cè)范圍。4.**反應(yīng)緩沖液(10XReactionBuffer)**:用于調(diào)整反應(yīng)體系的pH值和離子強(qiáng)度,保證酶活的正常發(fā)揮。5.**Benzonase底物(5XBenzonaseSubstrate)**:這是含有熒光標(biāo)記的DNA探針,用于檢測(cè)Benzonase的活性。當(dāng)?shù)孜锉籅enzonase切割后,熒光信號(hào)增強(qiáng),從而可以檢測(cè)到Benzonase的存在。6.**無(wú)核酸酶水(Nuclease-freeWater)**:確保在稀釋和樣品準(zhǔn)備過(guò)程中不會(huì)引入額外的核酸酶污染。FnCas12a的雙鏈或單鏈DNA靶標(biāo)都能激發(fā)其反式剪切活性,即在形成三元復(fù)合物后,針對(duì)非特異序列ssDNA的剪切。
合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒是一種實(shí)驗(yàn)室工具,用于從RNA模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成DNA。逆轉(zhuǎn)錄是一種酶促反應(yīng),其中RNA模板被逆轉(zhuǎn)錄酶(一種特殊的DNA聚合酶)讀取,并根據(jù)RNA序列合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。這個(gè)過(guò)程在分子生物學(xué)研究中非常重要,因?yàn)樗试S科學(xué)家從RNA樣品中獲取遺傳信息,并進(jìn)行進(jìn)一步的分析和應(yīng)用。cDNA合成試劑盒通常包含以下關(guān)鍵組分:1.**逆轉(zhuǎn)錄酶**:一種特殊的酶,能夠以RNA為模板合成DNA鏈。例如,M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶是一種常用的逆轉(zhuǎn)錄酶。2.**RNase抑制劑**:一種蛋白質(zhì),可以防止RNA樣品在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被環(huán)境中的RNase酶降解。3.**緩沖液**:提供適宜的化學(xué)環(huán)境,保證逆轉(zhuǎn)錄酶的活性和反應(yīng)的順利進(jìn)行。4.**dNTPs**:四種去氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP和dTTP),是合成DNA鏈的原料。5.**引物**:短的單鏈DNA或RNA基礎(chǔ)片段,用于啟動(dòng)cDNA的合成。常見(jiàn)的引物類(lèi)型包括oligo(dT)引物(針對(duì)mRNA的poly(A)尾)、隨機(jī)引物或特異性引物。6.**水**:通常是無(wú)核酸酶的水,以避免樣品被污染。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I具有特異性識(shí)別能力,能夠識(shí)別雙鏈DNA中的5'-(C/T)CCTT-3'序列。Recombinant Human IL-18BP Protein,hFc Tag
在目標(biāo)蛋白的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽。有助于通過(guò)親和層析進(jìn)行蛋白純化,而Avi標(biāo)簽則可以用于生物素。Recombinant Human RETProtein,His Tag
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒,它通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類(lèi)試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的組分,以確保高效和準(zhǔn)確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,這意味著在合成cDNA鏈的過(guò)程中不會(huì)發(fā)生RNA的降解,從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA,特別是從較長(zhǎng)的模板(可達(dá)13kb)。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉(zhuǎn)錄酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過(guò)點(diǎn)突變完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,這是一種重組蛋白,可有效保護(hù)RNA在高達(dá)55°C的溫度下不受RNases的降解。-緩沖液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應(yīng)。-有時(shí)還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟r(shí)PCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大。此外,可以在cDNA合成過(guò)程中加入放射性或非放射性標(biāo)記的核苷酸,以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實(shí)驗(yàn)中作為探針使用。Recombinant Human RETProtein,His Tag