河南進(jìn)口胰酶供應(yīng)商家

    使**或細(xì)胞片分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長(zhǎng)短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等）、消化時(shí)的溫度（氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤(rùn)；一般消化時(shí)間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細(xì)胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為透明、點(diǎn)狀（出現(xiàn)細(xì)小空隙）時(shí)，棄去細(xì)胞消化液，或看見(jiàn)培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的完全培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；如見(jiàn)大量細(xì)胞片狀脫落，已消化過(guò)頭，則不能頃倒消化液而直接進(jìn)行下一步操作。（消化過(guò)頭，可造成大量細(xì)胞從瓶壁上脫下，甚至造成細(xì)胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入完全培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。胰酶配置方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對(duì)細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)pH，過(guò)濾**。）3、pbs（：稱(chēng)取胰酶粉末。細(xì)胞培養(yǎng)中胰酶的作用一般是分解脂肪等。河南進(jìn)口胰酶供應(yīng)商家

胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋。該消化液已用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說(shuō)明：貼壁細(xì)胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅）,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)；此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液；加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。河南進(jìn)口胰酶供應(yīng)商家胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。

    (含)英文名:(含)儲(chǔ)存條件:-20℃產(chǎn)品簡(jiǎn)介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒(méi)有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,這種過(guò)程即自動(dòng)催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽,進(jìn)而分解為氨基酸,其**適溫度約為37℃。胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()由、除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,通常室溫下1min左右就可以消化大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說(shuō)明(*供參考):1.貼壁細(xì)胞的消化①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,去除殘余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液(),略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置。(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰蛋白酶-碳酸氫銨溶液()重新消化。⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落。

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在PH 8.0和37℃時(shí)，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果。實(shí)際消化后細(xì)胞狀態(tài)不會(huì)有太大差異，注意控制消化時(shí)間即可。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類(lèi)、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時(shí)，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和，對(duì)干細(xì)胞損傷較小，但是，價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時(shí)候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過(guò)頭的情況下，如果干細(xì)胞下來(lái)的比較多了，這時(shí)可以連同cmf或pbs加上營(yíng)養(yǎng)液一起傳。營(yíng)養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化，但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的。對(duì)于容易消化的干細(xì)胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴(lài)殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。胰蛋白酶是一種異源蛋白酶，與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)。西藏進(jìn)口胰酶產(chǎn)品介紹

在消化酶中，胰酶主要用于促進(jìn)消化。河南進(jìn)口胰酶供應(yīng)商家

細(xì)胞消化胰酶的配制對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱(chēng)胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2+，增加消化效力河南進(jìn)口胰酶供應(yīng)商家