中國臺灣胰酶常見問題

    胰蛋白酶**點(diǎn)評胰蛋白酶能使痰、血凝塊溶化變稀，易于引流排痰，加速創(chuàng)面愈合凈化，促進(jìn)肉芽**增生，而不損傷正常**，臨床上有消消腫功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的**或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶**劑終止胰酶對細(xì)胞的作用。1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為%，用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調(diào)PH到左右）或PBS（D-hanks）液中。攪拌混勻，置于4℃內(nèi)過夜。2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內(nèi)用注射濾器（微米微孔濾膜）抽濾**。3.分裝成小瓶于-20℃保存以備使用可！詞條圖冊更多圖冊參考資料1.胰蛋白酶．化學(xué)品數(shù)據(jù)庫[引用日期2017-05-26].***典**會(huì)，***典2010版[M]，北京：**醫(yī)*科技出版社。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。中國臺灣胰酶常見問題

對一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2，增加消化效力廣東胰酶哪個(gè)好胰酶PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說，盡量不要用水來溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細(xì)胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時(shí)調(diào)整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細(xì)胞會(huì)受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞。9、消化時(shí)。

    胰蛋白酶：（Trypsin）為蛋白酶的一種，是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化（如雞胚原代成纖維細(xì)胞）可用胰酶進(jìn)行消化，可以不加EDTA。 胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):1.研究的對象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。胰酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用？青海重組胰酶供應(yīng)商

變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請放心使用。中國臺灣胰酶常見問題

胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用說明：貼壁細(xì)胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅）,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來；此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液；加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。中國臺灣胰酶常見問題