甘肅國產(chǎn)胰酶常見問題

胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細(xì)胞在自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。使用胰酶時需注意哪些細(xì)節(jié)問題？在使用胰酶（Trypsins）細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CDMarker也可能會下降。胰酶進(jìn)行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對于纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶可以用于原代細(xì)胞的傳代過程中分散組織。甘肅國產(chǎn)胰酶常見問題

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):1.研究的對象是活細(xì)胞在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。四川進(jìn)口胰酶哪個好使用胰酶細(xì)胞消化液(不含EDTA)的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。

1、胰酶是，就是說PBS,注意，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細(xì)胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調(diào)整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細(xì)胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾**。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候?qū)ι?*PBS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會。

    冰凍保存，但不得反復(fù)凍融。供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，加。測定法取底物溶液、（pH）1ml，混勻，作為空白。取供試品溶液（預(yù)熱至25℃±℃），立即計時并搖勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在237nm的波長處，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘，每30秒鐘吸光度的變化率應(yīng)恒定，且恒定時間不得少于3分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)，作圖，取在3分鐘內(nèi)成直線部分的吸光度，按下式計算。式中P為每2500胰蛋白酶單位中含糜蛋白酶的量，單位；A2為直線上開始的吸光度；A1為直線上終止的吸光度；T為A2至A1讀數(shù)的時間，分；W為測定液中含供試品的量，mg;，吸光度每分鐘改變，即相當(dāng)于1個糜蛋白酶單位。每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。干燥失重取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑，在60℃減壓干燥4小時，減失重量不得過（2010年版*典二部附錄ⅧL）。胰蛋白酶效價測定底物溶液的制備取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽，加水溶解使成100ml，作為底物原液；取10ml，用磷酸鹽緩沖液（取，pH值為）稀釋成100ml，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），恒溫于℃±℃，以水作空白。胰酶細(xì)胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動物的胰臟提取，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個氨基酸，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時不可逆失活。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用。[1]EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑。河北EDTA胰酶進(jìn)貨價

胰酶細(xì)胞消化液(不含EDTA)消化細(xì)胞時間不宜過長,否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差。甘肅國產(chǎn)胰酶常見問題

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？能，對于胰酶呈黃色的問題，不同品牌也都對此現(xiàn)象進(jìn)行了測試實驗。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請放心使用。細(xì)胞消化時，胰酶不去除對細(xì)胞的影響？細(xì)胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要徹底清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存甘肅國產(chǎn)胰酶常見問題