中國(guó)臺(tái)灣DMEM高糖培養(yǎng)基產(chǎn)品介紹

    式中：N0—開始**（t=0）時(shí)原有活菌數(shù)；Nt----經(jīng)時(shí)間t后殘存活菌數(shù)。k：意義同上；t：表示理論**時(shí)間k=（）logNt/N0；比死亡速率常數(shù)K，K值大，表明微生物容易死亡。理論**時(shí)間的計(jì)算需要注意以下幾個(gè)問(wèn)題：（1）K值因不同的微生物種類不同、不同的生理狀態(tài)、不同的外界環(huán)境，差別很大，實(shí)質(zhì)上，它是微生物熱阻的一種表示形式，微生物的熱阻越大，K值也越小?？梢匀∧蜔嵝匝挎邨U菌的K進(jìn)行計(jì)算。(2)在計(jì)算過(guò)程中，N0，Nt如何取值？N0為**開始時(shí)培養(yǎng)基中活微生物數(shù)，可以參考一般培養(yǎng)基中的活微生物數(shù)為（1-2）×107個(gè)/ml；Nt通常取，既**失敗的概率為千分之一。（3）上述**時(shí)間，通常稱之為理論**時(shí)間，只可以用于工程計(jì)算中，在實(shí)踐過(guò)程中，因蒸汽的壓力問(wèn)題（不穩(wěn)定）、蒸汽的流量問(wèn)題有很大差別，甚至培養(yǎng)基中的固體顆粒的大小、培養(yǎng)基的粘度等因素，都會(huì)影響**效果，實(shí)際的設(shè)計(jì)和操作計(jì)算時(shí)間可作適當(dāng)比例的延長(zhǎng)或縮短。在實(shí)際生產(chǎn)中，通常采用經(jīng)驗(yàn)數(shù)值：間歇**，121℃，20—30分鐘；連續(xù)**，137℃，15—30s，在維持罐中保溫8—20分鐘。4、**溫度的選擇在培養(yǎng)基**過(guò)程中，除了雜菌死亡，還伴隨著培養(yǎng)基成分的破壞。因此必須選擇既能達(dá)到**目的。無(wú)酚紅培養(yǎng)基適用于對(duì)酚紅敏感的實(shí)驗(yàn)。中國(guó)臺(tái)灣DMEM高糖培養(yǎng)基產(chǎn)品介紹

    流加質(zhì)量百分比濃度為20％的葡萄糖維持殘?zhí)遣坏陀冢ィ骷酉輨┫?。?shí)施例2一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基，其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b；所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加，然后間隔24h添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖100g/l，酵母浸膏25g/l，k2hpo41g/l，mgso4·7h2o70mg/l，2-羥基乙胺20mg/l，cecl35mg/l，mnso4·h2o2mg/l，feso4·7h2o2mg/l，vb15mg/l，生物素5μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a；所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸7g/l，尿素2g/l，殼聚糖50mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b；采用常規(guī)發(fā)酵工藝：將黃色短桿菌gdk-9按8％接種量將種子液（od600nm為）接入裝有60l發(fā)酵培養(yǎng)基a的100l發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)24h，然后添加10l發(fā)酵培養(yǎng)基b，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)24h，收集發(fā)酵液；整個(gè)發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，控制發(fā)酵溫度35℃，通風(fēng)比1∶，攪拌轉(zhuǎn)速300r/min，溶氧維持在20％，流加質(zhì)量百分比濃度為20％的葡萄糖維持殘?zhí)遣坏陀冢?，流加消泡劑消泡。?shí)施例3一、cecl3稀土鹽對(duì)菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。廣東MEM培養(yǎng)基進(jìn)口F12培養(yǎng)基適用于基因編輯和轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

    mgso4·7h2o20-200mg/l，2-羥基乙胺10-50mg/l，cecl31-20mg/l，mnso4·h2o1-10mg/l，feso4·7h2o1-10mg/l，vb15-50mg/l，生物素1-10μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為6-7，121℃**，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。更推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，2-羥基乙胺40mg/l，cecl310mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a。推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸1-10g/l，尿素1-5g/l，殼聚糖20-100mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph，**，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b；更推薦地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸5g/l，尿素2g/l，殼聚糖80mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下幾個(gè)方面：本發(fā)明發(fā)酵培養(yǎng)基采用兩部分組成，發(fā)酵培養(yǎng)基a側(cè)重于菌株增殖的提升，發(fā)酵培養(yǎng)基b側(cè)重于谷氨酸的合成和分泌；前期細(xì)胞增殖時(shí)。

    4、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其不含碘化鉀，在絕大多數(shù)植物中，碘元素不是必需元素，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去除碘化鉀對(duì)植物**培養(yǎng)沒有影響，并且植物在脫離培養(yǎng)基進(jìn)行后期培養(yǎng)時(shí)仍可以從土壤等基質(zhì)中富集碘元素，去掉碘化鉀成分，也簡(jiǎn)化了培養(yǎng)基配制過(guò)程。5、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o，該替換減少的**根離子通過(guò)適當(dāng)增加**銨成分來(lái)補(bǔ)充，該替換主要基于兩個(gè)特征，一方面，nafeedta是可溶性螯合鐵，更容易被植物吸收，有利于植物葉綠體發(fā)育，另一方面，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等眾多植物**培養(yǎng)基原始ph偏低及ph波動(dòng)大的主要原因，本發(fā)明培養(yǎng)基中使用nafeedta之后，經(jīng)ph為，而植物**適宜生長(zhǎng)的ph一般為，因此，使用nafeedta既促進(jìn)了植物對(duì)鐵離子的吸收，又有利于培養(yǎng)基ph的穩(wěn)定。6、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量，增加了cuso4·5h2o、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇的用量，該改變特征在于，有效減少愈傷**玻璃化發(fā)生，減少酚類物質(zhì)產(chǎn)生，提高愈傷**的出愈率，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，優(yōu)化后的培養(yǎng)基出愈時(shí)間提前，對(duì)多種植物的愈傷**誘導(dǎo)是有益的。MEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本環(huán)境。

    3)擬南芥葉片愈傷**的誘導(dǎo)方法：用手術(shù)剪刀剪開長(zhǎng)勢(shì)良好的無(wú)菌葉片，用鑷子將其取出擺放在步驟(1)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，使傷口接觸培養(yǎng)基；于溫度23-25℃、濕度50-70％、光照強(qiáng)度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間16h、黑暗時(shí)間8h)條件下培養(yǎng)。(4)擬南芥根愈傷**的誘導(dǎo)方法：用鑷子取出無(wú)菌苗的根，用手術(shù)剪刀剪開后平鋪于步驟(2)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同步驟(3)。(5)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)6-8d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％；擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)5-7d在切口處開始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)20-22d獲得較大體積的淡黃色松脆型愈傷**，且在愈傷**周圍觀察到大量致密分布的白毛，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％。如圖5所示。對(duì)比培養(yǎng)例5：將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例5，ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，培養(yǎng)7-10d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**，培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團(tuán)塊狀愈傷**，顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100％。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)支持。甘肅RPMI1640培養(yǎng)基供應(yīng)商

F12培養(yǎng)基在細(xì)胞分化研究中表現(xiàn)優(yōu)越。中國(guó)臺(tái)灣DMEM高糖培養(yǎng)基產(chǎn)品介紹

    將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)；b、**消毒：于無(wú)菌環(huán)境下，將挑選的種子置于無(wú)菌三角瓶中，用無(wú)菌水清洗3-5次，75％酒精搖動(dòng)清洗5min，無(wú)菌水清洗3-5次，5％naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動(dòng)30s)，清水洗3-5次，種子表面的無(wú)菌水可用干燥的無(wú)菌濾紙吸去。(2)配制誘導(dǎo)培養(yǎng)基：cs基本培養(yǎng)基+，用超純水溶解，。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。(3)愈傷**的誘導(dǎo)方法：用彎頭鑷子將無(wú)菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)培養(yǎng)基，胚貼于培養(yǎng)基表面；于溫度24-26℃、濕度50-70％、光照強(qiáng)度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間16h、黑暗時(shí)間8h)條件下培養(yǎng)。(4)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，經(jīng)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團(tuán)狀愈傷**，出愈率為100％。如圖7所示。對(duì)比培養(yǎng)例7：將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實(shí)例7，ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為：水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，經(jīng)ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團(tuán)狀愈傷**，出愈率為100％。如圖7所示。中國(guó)臺(tái)灣DMEM高糖培養(yǎng)基產(chǎn)品介紹