寧夏減血清培養(yǎng)基常見問題

    在工作臺上把已經(jīng)沖洗干凈的外植體浸入75％酒精中消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，使用白貓漂白水和無菌水按1：4的體積比配制消毒液，將外植體放入消毒液浸泡40min。通過采用上述技術(shù)方案，這種方式對外植體消毒方法簡單，能夠**降低外植體的死亡率，消毒成活率較高。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為：在s1中，外植體選擇為**繡球的枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分。綜上所述，本發(fā)明包括以下至少一種有益技術(shù)效果：本發(fā)明通過液體**培養(yǎng)技術(shù)，以芽為原材料，獲取方便，增殖倍率高達8～10倍，生根率達到95％以上，苗木規(guī)格整齊，性狀保持穩(wěn)定，同時節(jié)省成本，適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量繡球種苗。附圖說明圖1是繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法的流程示意圖。具體實施方式以下結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步詳細說明。實施例：參照圖1，為本發(fā)明公開的一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法，具體步驟如下：(一)、試驗材料：供試材料采自江蘇東郁植物科技有限公司苗圃的**繡球，品種為無盡夏(endlesssummer“bloomstruck”)，外植體選用當(dāng)年生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分。(二)、試驗方法：繡球**培養(yǎng)過程按以下步驟進行：初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)。。使用減血清培養(yǎng)基減少了實驗中血清帶來的變異性。寧夏減血清培養(yǎng)基常見問題

    可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑，降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力，減少氣泡的形成。4.細胞培養(yǎng)基的**及儲存**方式及注意事項細胞培養(yǎng)基**的方式分為高壓**和膜過濾**，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，**方式也可能不同。①高壓**某些培養(yǎng)基（如MEM）可進行高壓**，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓**后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高壓**的培養(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失，不需將**時間延長。絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓**。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過濾消毒以除去**?？晒┻^濾**使用的濾膜很多，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾**是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法，常采用μm孔徑的濾膜，部份采用μm孔徑。與高壓過濾方式相比，濾膜具有使用期限且價格較高，但對細胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。通常液體細胞培養(yǎng)基避免-20℃凍存。山東培養(yǎng)基價格查詢RPMI1640培養(yǎng)基提高了細胞的存活率和生長速率。

    本發(fā)明涉及植物**培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。背景技術(shù)：繡球(hydrangeamacrophylla)為虎耳草科繡球?qū)俾淙~灌木,別名八仙花、**花、粉團花、雪球花、草繡球等，是園林上應(yīng)用***的觀賞植物。原產(chǎn)于我國長江流域及以南，自然株高2m。葉對生，倒卵或橢圓形，邊緣有鋸齒，傘房花序頂生，直徑20cm，近球形?；ㄉ嘧?，青白色，漸轉(zhuǎn)粉紅色，再轉(zhuǎn)紫紅色，花色美艷。其花色又常隨土壤的酸堿度而改變,土壤ph值4～6時，花色多呈藍色；ph值，則呈紅色。繡球花葉片翠綠，花色鮮艷，盛開時花團錦簇，美麗多姿，每簇花可開2個月之久，觀賞期長。由于繡球花的孕性花極為少數(shù)，所以不易結(jié)種，常用分株、壓條或扦插方法繁殖，但分株、壓條繁殖倍率低，速度慢，而扦插繁殖又會受到季節(jié)的限制，不能常年生產(chǎn)苗木，很難滿足市場的需求。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的之一是提供一種繁殖周期短，效率高，成本低的繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法，具體步驟如下：s1：外植體選擇；s2：外植體消毒；s3：誘導(dǎo)培養(yǎng)；s4：增殖培養(yǎng)；s5：生根培養(yǎng)，其中。

    2-羥基乙胺可以促進磷脂酰乙醇胺細胞壁組分的合成，從而提高菌株增殖速率，后期菌株增殖放緩，以產(chǎn)酸為主，2-羥基乙胺還能夠作為陽離子表面活性劑，使得細胞壁疏松，提高細胞通透性，促進谷氨酸釋放到發(fā)酵液；cecl3稀土鹽能夠促進菌株增殖，提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力，提高谷氨酸的產(chǎn)量；但是過高的濃度會造成菌株增殖放緩和死亡，谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降；發(fā)酵中后期，菌株增殖速度放緩，以產(chǎn)酸為主，殼聚糖上的氨基與**細胞壁中帶負電荷的磷壁酸或脂多糖結(jié)合，并螯合mg2+、ca2+等陽離子,從而改變細胞壁的通透性，促進谷氨酸分泌到胞外。發(fā)酵培養(yǎng)基中添加了琥珀酸，三羧酸循環(huán)有一定促進作用，而對乙醛酸循環(huán)途徑具有**作用，從而導(dǎo)致中間代謝物更多地流向三羧酸循環(huán)途徑，進而促進谷氨酸產(chǎn)量的增加。說明書附圖圖1：cecl3稀土鹽對菌體濃度的影響；圖2：cecl3稀土鹽對谷氨酸含量的影響；圖3：2-羥基乙胺對菌體濃度的影響；圖4：2-羥基乙胺對谷氨酸含量的影響；圖5：2-羥基乙胺對糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。具體實施方式為了使本技術(shù)領(lǐng)域：的人員更好地理解本申請中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合本申請具體實施例，對本申請的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然。使用減血清培養(yǎng)基能減少實驗中的血清干擾。

    3)培養(yǎng)方法：將配制的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中，用移液槍吸取帶有無菌水的無菌種子，吹打在無菌濾紙上，用無菌尖頭鑷子將種子均勻點播在培養(yǎng)基上；于溫度22-24℃、濕度50-70％、光照強度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：哥倫比亞型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)16d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯，蓮座葉均已伸展，葉色濃綠，根系發(fā)達、平均主根長為。如圖1所示。對比培養(yǎng)例1：將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基，其余完全同培養(yǎng)實例1，1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果為：哥倫比亞型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100％，培養(yǎng)16d的幼苗，表現(xiàn)為植株健壯，蓮座葉部分伸展，葉色濃綠，根系發(fā)達、平均主根長為。如圖1所示。培養(yǎng)實例1和對比培養(yǎng)例1的培養(yǎng)結(jié)果比較：哥倫比亞型擬南芥在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100％；在相同條件下培養(yǎng)16d時，與1/2ms生長培養(yǎng)基相比，1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳，主要表現(xiàn)為蓮座葉長勢更好、根系更為發(fā)達。如圖1所示。無血清培養(yǎng)基為細胞培養(yǎng)提供了更清晰的背景。廣西Ham's F12培養(yǎng)基價格信息

F12培養(yǎng)基適用于基因編輯和轉(zhuǎn)染實驗。寧夏減血清培養(yǎng)基常見問題

    維持15-20分鐘，可殺滅所有的繁殖體和芽胞。本法適用于耐高溫、耐濕物品的**，如普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。（二）下向主要介紹高壓蒸氣**器**效果的驗證方法高壓蒸氣**器使物品**后達到無菌要求，這是**實驗中的基本保證。高壓**器**效果是否合格足實驗成敗的**基礎(chǔ)**關(guān)鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解，不需高壓**外，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓**15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基**不徹底，直接關(guān)系到對**的無菌試驗結(jié)果。因此必須認真對高壓**器進行**效果的驗證。為此我們提供了進行**效果驗證的一個簡易可行的方法。1．試驗材料(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5CFU/片。(2)121℃壓力蒸氣**化學(xué)指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓**20分鐘后備用。(4)O—150℃留點溫度計。2．方法與結(jié)果將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中。化學(xué)指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓**器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如**器為二層，則需放10處。寧夏減血清培養(yǎng)基常見問題