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來源: 發(fā)布時間:2024-10-29

CaMPARI,一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術,包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。其原理在于,CaMPARI蛋白在正常狀態(tài)下會發(fā)出綠色熒光,而如果對這種蛋白同時使用高濃度鈣離子與紫外光處理,它就會不可逆、長久地轉(zhuǎn)變成另一種能發(fā)出紅色熒光的構(gòu)象,即實現(xiàn)將瞬間的神經(jīng)元活動變成長久的紅色熒光蛋白表達。研究人員通過轉(zhuǎn)基因技術將這種新型蛋白導入到實驗動物的神經(jīng)系統(tǒng)中,然后用度的紫外光照射動物的大腦,通過檢查熒光,找到發(fā)紅色熒光的神經(jīng)元,這些神經(jīng)元即是在紫外光照射期間活躍的神經(jīng)元。由于紫外光可以對著整個大腦進行照射,所以理論上,人們可以對全腦進行檢查。對鈣離子的功能研究中,鈣指示劑是必不可少的工具。美國inscopix鈣成像什么價格

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單光子顯微技術是較成熟的熒光顯微技術,但由于其使用的激發(fā)光波長較短,成像深度有限;能量較大,會造成對熒光物質(zhì)的漂白,光毒性嚴重。激光共焦掃描顯微鏡由于共焦顯微鏡的孔徑很小,實現(xiàn)樣本三維成像要逐點掃描,成像速度慢,對樣本損害大,很難用于長時間活細胞成像。而寬場顯微鏡能夠很好地實現(xiàn)實時動態(tài)成像,光漂白小,因而較早應用于活細胞內(nèi)的實時檢測,但寬場顯微鏡由于離焦信號的干擾,難以實現(xiàn)多維成像。Derrick想重點介紹一下較為常用的觀察設備——雙光子熒光顯微鏡(Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy)。雙光子顯微成像技術是近些年發(fā)展起來的結(jié)合了共聚焦激光掃描顯微鏡和雙光子激發(fā)技術的一種新型非線性光學成像方法,采用長波激發(fā),能對組織進行深層次成像。常用的比較好激發(fā)波長大多位于800-900nm,而水、血液和固有組織發(fā)色團對這個波段的光吸收率低,此外散射的激發(fā)光子不能激發(fā)樣品,因此背景第,光損傷小,適用于在體檢測。雙光子熒光成像技術能準確定位細胞內(nèi)置入的微電極位置,從而觀察胞體、樹突甚至單個樹突棘的活性。研究者可完整的觀察神經(jīng)組織的分辨熒光圖像,甚至可以分辨神經(jīng)細胞單個樹突棘中的鈣分布。南京細胞鈣離子鈣成像代理鈣成像技術發(fā)現(xiàn)鈣離子產(chǎn)生各種各樣的胞內(nèi)信號。

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利用鈣成像技術記錄大腦活動,隨著功能光學成像技術的發(fā)展,神經(jīng)學家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此細胞的功能狀態(tài)。目前它被廣泛應用于實時監(jiān)測一群相關神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,從而判斷其功能活動。該技術的出現(xiàn)使得科學家可以親眼目睹神經(jīng)信號在神經(jīng)網(wǎng)絡之中時間和空間上的傳遞穿梭。

大家都知道,只有游離鈣才具有生物學活性,而細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時也受鈣結(jié)合蛋白的影響。細胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時受體電位C型通道(TRPC)等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來,以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。鈣成像系統(tǒng)具有單細胞分辨率的大視野的特征。

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霍華德休斯頓醫(yī)學研究所(HHMI)ScottSternson課題組研究了影響這種源源不斷的食欲的神經(jīng)機制。他們通過使用Inscopix小顯微鏡觀察小鼠腦干區(qū)域的神經(jīng)元,發(fā)現(xiàn)貪念美食的小鼠可能是因為特殊的大腦區(qū)域?qū)γ朗澈湍滩璞绕渌∈蟾用舾?。本能會?qū)使我們在感到饑餓和干渴的時候?qū)ふ沂澄?,在找到食物或水時通過眼睛看、鼻子聞、嘴巴嘗等方式來感受和決定要不要吃,吃到一定程度產(chǎn)生滿足感(或是吃了還想吃的不滿足感)。因此,要把大腦中匯集的關于吃喝的各類信號分清楚,并找出控制不同吃喝行為的神經(jīng)環(huán)路無疑是很有挑戰(zhàn)的任務。ScottSternson博士的研究團隊在小鼠大腦中尋找饑餓和干渴神經(jīng)環(huán)路共存的腦區(qū)。他們注意到,腦干的藍斑區(qū)(locuscoeruleus)附近有一群谷氨酸能神經(jīng)元(被稱為periLC神經(jīng)元),參與進食和飲水的行為,是餓和渴的匯聚點。為了研究這些神經(jīng)細胞的功能,研究小組開發(fā)了一種技術,可以讓小鼠在自由活動的同時,通過Inscopix自由活動鈣成像顯微鏡觀察記錄腦干中periLC神經(jīng)元的活動。這項研究的作者龔蓉博士表示,解決這個技術是此項研究的關鍵。專業(yè)的鈣成像顯微鏡使得鈣成像變的直接。美國動物神經(jīng)元鈣成像動物行為學

細胞對鈣離子有一套完備的監(jiān)控系統(tǒng)以維持鈣的內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡。美國inscopix鈣成像什么價格

鈣成像具有以下幾個優(yōu)勢:1.非侵入性:鈣成像技術可以在活物細胞或組織中進行觀察,無需破壞細胞或組織的完整性,因此是一種非侵入性的技術。2.高時空分辨率:鈣成像技術可以實時觀察細胞內(nèi)鈣離子的動態(tài)變化,具有較高的時空分辨率。可以捕捉到鈣離子濃度的瞬時變化,揭示細胞內(nèi)信號傳導的快速過程。3.多樣性:鈣成像技術可以使用不同的熒光探針或基因工程技術,實現(xiàn)對不同類型的細胞或組織進行鈣成像??梢愿鶕?jù)需要選擇適合的探針或方法,擴展應用范圍。4.可定量分析:通過鈣成像技術可以獲得熒光信號的強度,可以進行定量分析,了解鈣離子濃度的變化程度??梢酝ㄟ^比較不同條件下的鈣成像結(jié)果,研究因素對鈣離子信號的調(diào)控作用。5.可應用于多個領域:鈣成像技術廣泛應用于神經(jīng)科學、細胞生物學、藥理學等領域??梢匝芯可窠?jīng)元活動、細胞信號傳導、細胞凋亡等生物過程,有助于揭示生物學機制和疾病發(fā)生及發(fā)展的過程。綜上所述,鈣成像技術具有非侵入性、高時空分辨率、多樣性、可定量分析和廣泛應用于多個領域等優(yōu)勢,成為研究細胞內(nèi)鈣離子動態(tài)變化的重要工具。美國inscopix鈣成像什么價格