進口單電極膜片鉗細胞功能特性

電壓鉗的缺點:目前電壓鉗技術(shù)主要用于研究巨火細胞的全細胞電流，特別是在分子克隆卵母細胞表達電流的鑒定中，發(fā)揮著不可替代的作用。然而，它也有其致命的弱點:1。微電極需要刺穿細胞膜進入細胞，導致細胞質(zhì)丟失，破壞細胞生理功能的完整性；2、不能確定單通道電流。由于電壓鉗位薄膜面積大，包含大量隨機開關(guān)的通道，背景噪聲大，往往會掩蓋單通道的電流。3.在小細胞(如直徑10-30μm的哺乳動物細胞)上進行電壓鉗實驗，技術(shù)難度更大。因為電極需要插入到細胞中，所以微電極的前端必須做得非常薄。如此薄的前端導致電極阻抗較大，往往為60~-80mω或120~150MΩ(視灌注液不同而定)。如此大的電極阻抗，不利于用細胞內(nèi)電流鉗或電壓鉗記錄時，短時間(0.1μs)內(nèi)將電流注入細胞，從而達到鉗制膜電壓或膜電流的目的。此外，插在小電池上的兩個電極會產(chǎn)生電容并降低電壓測量電極的反應(yīng)能力。浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容。進口單電極膜片鉗細胞功能特性

離子通道是一種特殊的膜蛋白，它橫跨整個膜結(jié)構(gòu)，是細胞內(nèi)部與部外聯(lián)系的橋梁和細胞內(nèi)外物質(zhì)交換的孔道，當通道開放時。細胞內(nèi)外的一些無機離子如Na，kCa等帶電離子可經(jīng)通道順濃度梯度或電位梯度進行跨膜擴散，從而形成這些帶電離子在膜內(nèi)外的不同分布態(tài)勢，這種態(tài)勢和在不同狀態(tài)下的動態(tài)變化是可興奮細胞靜息電位和動作電的基礎(chǔ)。這些無機離子通過離子通道的進圍所產(chǎn)生的電活動是生命活動的基礎(chǔ)，只有在此基礎(chǔ)上才可能有腺體分泌、肌肉收縮、基因表達、新陳代謝等生命活動。離子通道結(jié)構(gòu)和功能障礙決定了許多疾病的發(fā)生和發(fā)展。因此，了解離子通道的結(jié)構(gòu)、功能以及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系對于從分子水平深入探討某些疾病的病理生理機制、發(fā)現(xiàn)特異藥物或措施等均具有十分重要的理論和實際意義。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團隊,7*41小時隨時人工在線咨詢.進口單電極膜片鉗細胞功能特性膜片鉗是一種用于夾持薄膜或其他薄片材料的工具。

膜片鉗技術(shù)與其他技術(shù)的結(jié)合Neher等**將膜片鉗技術(shù)與Fura2熒光鈣測量技術(shù)相結(jié)合，同時進行細胞內(nèi)熒光強度、細胞膜離子通道電流、細胞膜電容等多項指標變化的快速交替測量，從而獲得同一事件過程中各因素的各自變化，進而分析這些變化之間的關(guān)系。Neher將能夠光解鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術(shù)，進而可以定量研究鈣離子濃度與分泌速率的關(guān)系以及相對較大的分泌速率。他還發(fā)明了膜片鉗的膜電容檢測與碳纖維電極的電化學檢測相結(jié)合的技術(shù)。然后***將光電聯(lián)合檢測技術(shù)和碳纖維電極電化學檢測技術(shù)相結(jié)合。這種結(jié)合既能研究分泌機制，又能鑒定分泌物質(zhì)，彌補了各單一方法的不足。Eberwine于1991年***將膜片鉗技術(shù)與RT-PCR技術(shù)相結(jié)合，可以在分子水平上解釋形態(tài)相似但電活動不同的結(jié)果，隨后開始了膜片鉗與分子生物學技術(shù)相結(jié)合的時代:基因重組技術(shù)和膜通道蛋白重建技術(shù)。

膜片鉗技術(shù)是一種細胞內(nèi)記錄技術(shù)，是研究離子通道活動的蕞佳工具，也是應(yīng)用蕞廣的電生理技術(shù)之一。該技術(shù)通過施加負壓將微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）的前端與細胞膜緊密接觸，形成GΩ以上的阻抗，使電極開口處的細胞膜與其周圍膜在電學上絕緣。被孤立的小膜片面積為μm量級，內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。玻璃微電極中含有一根浸入電解溶液中的導線，用于傳導離子。在此基礎(chǔ)上對該膜片施行電壓鉗位（即保持跨膜電壓恒定），如果單個離子通道被包含在膜片內(nèi)，則可對此膜片上的離子通道的電流進行監(jiān)測記錄。通過觀測單個通道開放和關(guān)閉的電流變化，可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量，并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細胞膜上分離出來，以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進行實驗研究。這種技術(shù)對小細胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。滔博生物膜片鉗實驗外包,基因?qū)嵙?蛋白細胞,免疫檢測,相關(guān)行業(yè)平臺,實地考察,數(shù)據(jù)可靠。

ePatch雖然設(shè)備非常小巧，但功能完備，傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備能做的實驗，用ePatch幾乎都能做。具有voltage-clamp，current-clamp，zerocurrent-clamp三種模式，自動電極電壓飄移補償，C-fast-C-slow-R-series-P/N補償，Bridgebalance補償?shù)裙δ??？梢宰鋈毎涗浺部梢宰鰡瓮ǖ烙涗洠てQ技術(shù)常做的離子通道電流，突觸后電流，動作電位檢測等實驗都能輕松實現(xiàn)。公司還為此開發(fā)了友好的控制和記錄軟件，筆者上手接觸了一下，發(fā)現(xiàn)跟AXON的軟件類似，并且程序編輯更為簡單易用。所記錄到的數(shù)據(jù)可以直接使用Clampfit進行分析，可以說對于使用過AXON設(shè)備的膜片鉗工作者來說，上手毫無難度。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團隊,7*61小時隨時人工在線咨詢.小片膜的孤立使對單個離子通道進行研究成為可能。美國全自動膜片鉗技術(shù)

脂質(zhì)層電導很低，由于雙分子層的結(jié)構(gòu)特點，形成了細胞的膜電容，通道蛋白開閉狀況主要決定了膜電導的數(shù)值。進口單電極膜片鉗細胞功能特性

電壓鉗技術(shù)是由科爾發(fā)明的，并在20世紀初由霍奇金和赫胥黎完善。其設(shè)計的主要目的是證明動作電位的產(chǎn)生機制，即動作電位的峰值電位是由于膜對鈉的通透性瞬間增加。但當時還沒有直接測量膜通透性的方法，所以用膜電導來測量離子通透性。膜電導測量的基礎(chǔ)是電學中的歐姆定律，如膜Na電導GNa與電化學驅(qū)動力(Em-ENa)的關(guān)系，膜電流INaGNa=INa/(Em-ENa)。因此，可以通過測量膜電流，然后利用歐姆定律來計算膜電導。然而，膜電導可以通過使用膜電流來計算。這個條件是通過電壓鉗技術(shù)實現(xiàn)的。下一張幻燈片中右邊的兩張圖顯示了squid的動作電位和動作電位過程中膜電流的變化，這是霍奇金和赫胥黎在半個世紀前用電壓鉗記錄的。他們的實驗證明了參與動作電位的離子電流由三種成分組成:Na、K、Cl。對這些離子流進行了定量分析。這項技術(shù)為闡明動作電位的本質(zhì)和離子通道的研究做出了巨大貢獻。進口單電極膜片鉗細胞功能特性