美國全自動膜片鉗電生理技術

來源: 發(fā)布時間:2024-06-15

電壓鉗的原理∶用兩根前列直徑0.5um的電極插入細胞內,一根電極用作記錄電極以記錄跨膜電位,用另一根電極作為電流注入電極,以固定膜電位。從而實現(xiàn)固定膜電位的同時記錄膜電流。電位記錄電極引導的膜電位(Vm)輸入電壓鉗放大器的負輸入端,而人為控制的指令電位(Vc)輸入正輸入端,放大器的正負輸入端子等電位,向正輸入端子施加指令電位(Vc)時,經過短路負端子可使膜片等電較,即Vm=Vc,從而達到電位鉗制的目的,并可維持一定的時間。Vc的不同變化將導致Vm的變化,從而引起細胞膜上電壓依賴性離子通道的開放,通道開放引起的離子流反過來又引起Vm的變化,致使Vm≠Vc,Vc與Vm的任何差值都會導致放大器有電壓輸出,將相反極性的電流注入細胞,以使Vc=Vm,注入電流的大小與跨膜離子流相等,但方向相反。因而注入的電流被認為是標本興奮時的跨膜電流值(通道電流)。在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。美國全自動膜片鉗電生理技術

美國全自動膜片鉗電生理技術,膜片鉗

膜片鉗技術∶從一小片(約幾平方微米)膜獲取電子學方面信息的技術,即保持跨膜電壓恒定——電壓鉗位,從而測量通過膜離子電流大小的技術。通過研究離子通道的離子流,從而了解離子運輸、信號傳遞等信息?;驹恚豪秘摲答侂娮泳€路,將微電極前列所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)觀察,從而研究其功能。研究離子通道的一種電生理技術,是施加負壓將玻璃微電極的前列(開口直徑約1μm)與細胞膜緊密接觸,形成高阻抗封接,可以精確記錄離子通道微小電流。能制備成細胞貼附、內面朝外和外面朝內三種單通道記錄方式,以及另一種記錄多通道的全細胞方式。膜片鉗技術實現(xiàn)了小片膜的孤立和高阻封接的形成,由于高阻封接使背景噪聲水平**降低,相對地增寬了記錄頻帶范圍,提高了分辨率。另外,它還具有良好的機械穩(wěn)定性和化學絕緣性。而小片膜的孤立使對單個離子通道進行研究成為可能。日本可升級膜片鉗價格膜片鉗技術原理膜片鉗技術是用玻璃微電極接觸細胞,形成吉歐姆(GΩ)阻抗。

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膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術不能替代的作用。該技術的主要缺陷是必須在細胞內插入兩個電極,對細胞損傷很大,在小細胞如元,就難以實現(xiàn),又因細胞形態(tài)復雜,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*49小時隨時人工在線咨詢.

膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的主要,它可用來作單通道或全細胞記錄,其工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。從原理來說,膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結構形式,即電阻反饋式和電容反饋式,前者是一種典型的結構,后者因用反饋電容取代了反饋電阻,降低了噪聲,所以特別適合較低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實驗的專門的計算機硬件及相應的軟件程序的相繼出現(xiàn),使得膜片鉗實驗操作簡便、效率提高、效率提高膜片鉗技術已成為研究離子通道的"金標準"。

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膜片鉗的基本原理則是利用負反饋電子線路,將微電極前列所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)觀察,從而研究其功能。膜片鉗技術實現(xiàn)膜電流固定的關鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細胞膜之間形成高阻密封,其阻抗數(shù)值可達10~100GΩ(此密封電阻是指微電極內與細胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高,故基本上可看成絕緣,其上之電流可看成零,形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不僅電學上近乎絕緣,在機械上也是較牢固的。又由于玻璃微電極前列管徑很小,其下膜面積只約1μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個或幾個通道,經這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內電位不變,則電極下的一小片細胞膜兩側的電位差就不變,從而實現(xiàn)電位固定。膜片鉗記錄技術與較早的單電極電壓鉗位相比進步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面。美國細胞膜片鉗蛋白質分子水平

膜片鉗記錄不但能夠在神經元胞體及其樹突上進行,而且可同時在這兩個不同的部位作膜片鉗記錄。美國全自動膜片鉗電生理技術

膜片鉗技術:從一小片膜(約幾平方微米)上獲取電子信息的技術,即保持跨膜電壓恒壓箝位的技術,從而測量通過膜的離子電流。通過研究離子通道中的離子流動,可以了解離子輸運、信號傳遞等信息?;驹?利用負反饋電子電路,將前排微電極吸附的細胞膜電位固定在一定水平,動態(tài)或靜態(tài)觀察通過通道的微小離子電流,從而研究其功能。一種研究離子通道的電生理技術是施加負壓,使玻璃微電極前沿(開口直徑約1μm)與細胞膜緊密接觸,形成高阻抗密封,可以準確記錄離子通道的微小電流??芍苽涑扇N單通道記錄模式:細胞貼附、內面向外、外面向內,以及另一種多通道全細胞記錄模式。膜片鉗技術實現(xiàn)了小膜的隔離和高阻密封的形成。由于高阻密封,背景噪聲水平降低,記錄頻帶范圍相對變寬,分辨率提高。此外,它還具有良好的機械穩(wěn)定性和化學絕緣性。小膜隔離使得研究單個離子通道成為可能。美國全自動膜片鉗電生理技術