進口全自動膜片鉗電壓鉗制

來源: 發(fā)布時間:2023-02-18

20世紀初由Cole發(fā)明,Hodgkin和Huxleyw完善,目的是為了證明動作電位的峰電位是由于膜對鈉的通透性發(fā)生了一過性的增大過程。但當時沒有直接測定膜通透性的辦法,于是就用膜對某種離子的電導來**該種離子的通透性。

為了弄清膜電導變化的機制和離子通道的存在,也為了克服電壓鉗的缺點Erwin和Bert在電壓鉗的基礎上發(fā)明了膜片鉗,并利用該技術***在蛙肌膜上記錄到PA級的乙酰膽堿激動的單通道電流,***證明了離子通道的存在。并證明在完整細胞膜上記錄到膜電流是許多單通道電流總和的結(jié)果。這一技術被譽為與分子克隆技術并駕齊驅(qū)的劃時代的偉大發(fā)明。二人因此獲得諾貝爾生理或醫(yī)學獎。 早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術作細胞內(nèi)電活動的記錄。進口全自動膜片鉗電壓鉗制

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ePatch的設計的一些亮點還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進行實驗記錄,你不用再專門拿一個實驗記錄本了,也不用再擔心本本上記錄的內(nèi)容找不到對應的數(shù)據(jù)了,系統(tǒng)會把他們一一對應起來。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,直接拖拽就可以,還伴隨著示例圖,讓你對你編輯的程序一目了然。實時的全細胞參數(shù)估算,包括封接電阻,膜電容,膜電阻等重要參數(shù)強大的在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/V graph,event detection,F(xiàn)FT,以及電流鉗模式下的AP threshold detection,AP frequency,AP slope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,你要是個程序達人,可以支持使用Matlab進行數(shù)據(jù)分析,如果沒有這樣的經(jīng)驗也沒有問題,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。細胞膜片鉗廠家在細胞膜的電興奮過程中,脂質(zhì)層膜電容的反應是被動的,其電流電壓曲線是線性的。

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1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),明顯降低了記錄時的噪聲實現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破。1981年Hamill和Neher等對該技術進行了改進,引進了膜片游離技術和全細胞記錄技術,從而使該技術更趨完善,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率。1983年10月,《Single-ChannelRecording》一書問世,奠定了膜片鉗技術的里程碑。Sakmann和Neher也因其杰出的工作和突出貢獻,榮獲1991年諾貝爾醫(yī)學和生理學獎。

膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的主要,它可用來作單通道或全細胞記錄,其工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。從原理來說,膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構形式,即電阻反饋式和電容反饋式,前者是一種典型的結(jié)構,后者因用反饋電容取代了反饋電阻,降低了噪聲,所以特別適合較低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實驗的專門的計算機硬件及相應的軟件程序的相繼出現(xiàn),使得膜片鉗實驗操作簡便、效率提高。如與EPC-9型膜片鉗放大器(內(nèi)含ITC-16數(shù)據(jù)采集/接口卡)配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT,它既可產(chǎn)生刺激波形,控制數(shù)據(jù)采集,又可分析數(shù)據(jù),同時具有用于膜電容監(jiān)測的鎖相放大器,多種軟件功能集成于一體。全自動膜片鉗技術采用的標本必須是懸浮細胞,像腦片這類標本無法采用。

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細胞是動物和人體的基本單元,細胞與細胞內(nèi)的通信是依靠其膜上的離子通道進行的,離子和離子通道是細胞興奮的基礎,亦即產(chǎn)生生物電信號的基礎,生物電信號通常用電學或電子學方法進行測量。由此形成了一門細胞學科--電生理學。膜片鉗技術已成為研究離子通道的黃金標準。電壓門控性離子通道:膜上通道蛋白的帶點集團在膜電位改變時,在電場的作用下,重新分布導致通道的關閉,同時有電荷移動,稱為門控電流。配體門控離子通道:神經(jīng)遞質(zhì)(如乙酰膽堿)、ji素等與通道蛋白上的特定位點結(jié)合,引起蛋白構像的改變,導致通道的打開。細胞是動物和人體的基本組成單元,細胞與細胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進行的。進口全自動膜片鉗電壓鉗制

浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容。進口全自動膜片鉗電壓鉗制

膜片鉗技術的創(chuàng)立取代了電壓鉗技術,是細胞電生理研究的一個飛躍,使得離子通道的研究,從宏觀深入到微觀,使昔日的“肉湯生理學(brothphysiology)”與“閃電生理學(lightningphysiology)”在分子水平上結(jié)合起來,使人們對膜通道的認識耳目一新。當前,生理學、生物物理學、生物化學、分子生物學和藥理學等多種學科正在把膜片鉗技術和膜通道蛋白重組技術、同位素示蹤技術和光譜技術等非電生理技術結(jié)合起來,協(xié)同對離子通道進行較全的研究。不少實驗室已經(jīng)將基因工程與膜片鉗技術結(jié)合起來,把通道蛋白有目的地重組于人工膜中進行研究。設想將合成的通道蛋白分子接種入機體以替換有缺陷和異常的通道的功能而達到的目的。進口全自動膜片鉗電壓鉗制

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