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干粉培養(yǎng)基有哪些注意事項(xiàng):①熔化培養(yǎng)基制備必須在玻璃容器中進(jìn)行,如果使用銅或鐵器皿,會(huì)影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。②注意按照先加水再加顆粒干粉培養(yǎng)基順序,反之則不利于培養(yǎng)基溶解。③單在必要時(shí)進(jìn)行加熱溶解操作,其加熱溫度也不要過(guò)高時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng),主要原因是高溫會(huì)破壞瓊脂和培養(yǎng)基中的一些營(yíng)養(yǎng)成分。④生產(chǎn)的干粉培養(yǎng)基和顆粒培養(yǎng)基都經(jīng)過(guò)pH校準(zhǔn),使用時(shí)無(wú)需特殊驗(yàn)證。因?yàn)楦邏簳?huì)影響pH值,則應(yīng)在高壓后驗(yàn)證pH值。⑤液體培養(yǎng)基通常是預(yù)先包裝好的,分裝時(shí)應(yīng)注意每管的用量不得高于試管的三分之二。⑥高壓后冷卻至五六十度環(huán)境,再導(dǎo)入平板,否則會(huì)形成更多的水蒸氣,導(dǎo)致細(xì)菌分離數(shù)量。培養(yǎng)基制備器功能強(qiáng)大的加熱器,能夠迅速加熱。上海培養(yǎng)基制備器售后
培養(yǎng)基制備方法與注意事項(xiàng):1、培養(yǎng)基配方選擇同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對(duì),再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來(lái)源。2、培養(yǎng)基制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱(chēng),配方及其來(lái)源,和各種成份的牌號(hào),好終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。3、培養(yǎng)基成份稱(chēng)量培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱(chēng)取并要注意防止錯(cuò)亂,好好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱(chēng)完一種成分即在配方上做出記號(hào),并將所需稱(chēng)取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱(chēng)取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱(chēng)取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。江蘇實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基長(zhǎng)時(shí)間的高溫滅菌會(huì)使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類(lèi)物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。
培養(yǎng)平板培養(yǎng)基是被用于獲得微生物純培養(yǎng)的很常用的固體培養(yǎng)基形式,它是冷卻凝固后的固體培養(yǎng)基在無(wú)菌培養(yǎng)皿中形成的培養(yǎng)基固體平面,常被簡(jiǎn)稱(chēng)為培養(yǎng)平板。也叫平面培養(yǎng)基、平皿培養(yǎng)基。平板培養(yǎng)基常用于單孢分離,測(cè)定菌絲生長(zhǎng)速度,觀察菌落的形態(tài),拮抗實(shí)驗(yàn),測(cè)定接種空間雜菌數(shù)。平板培養(yǎng)基制作方法如下:將培養(yǎng)皿洗凈、干燥,使各培養(yǎng)皿蓋方向一致,用牛皮紙包好,或放入特制鐵罐內(nèi),注明皿蓋的方向。高壓滅菌或干燥滅菌后備用。取剛滅菌后尚未凝固的培養(yǎng)基置于無(wú)菌箱或超凈工作臺(tái)內(nèi),先左手持三角瓶,右手反轉(zhuǎn)手掌用中指和無(wú)名指撥出棉塞或硅膠賽(或不翻轉(zhuǎn)手掌用小指和手掌撥出棉塞),同時(shí)將三角瓶轉(zhuǎn)換至右手,而后左手拿平皿,以大拇指和中指將皿蓋打開(kāi)一縫,至瓶口剛好伸人。三角瓶口經(jīng)火焰燒灼后,傾入滅菌或溶化、冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基約15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上,以免沾染皿壁),迅速蓋好皿蓋,置于桌上輕輕旋轉(zhuǎn)平皿,使培養(yǎng)基均勻分布于整個(gè)平皿底部,冷凝后即為平板培養(yǎng)基。有時(shí)凝固后的培養(yǎng)基表面有冷凝水,可將平皿蓋打開(kāi)倒置于37℃溫箱,除去冷凝水,否則將影響平板分離培養(yǎng)效果。為防止冷凝水過(guò)多,也可將培養(yǎng)基冷卻至45~50°C再倒平板。
在制備培養(yǎng)基時(shí),通常要考慮以下因素:(1)pH值多數(shù)細(xì)胞系在pH=7.4下生長(zhǎng)得很好。盡管各細(xì)胞株之間細(xì)胞生長(zhǎng)*pH值變化很小,但一些正常的成纖維細(xì)胞系以pH=7.4~7.7,轉(zhuǎn)化細(xì)胞以pH=7.0~7.4更合適。據(jù)報(bào)道,上皮細(xì)胞以pH=5.5合適。為確定*佳pH值,做一個(gè)簡(jiǎn)單的生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)或特殊功能分析酚紅常用作指示劑,pH=7.4呈紅色,pH=7.0變橙色,pH=6.5變黃色,而pH=7.6呈紅色中略帶藍(lán)色,pH=7.8呈紫色。由于對(duì)顏色的觀察有很大的主觀性,因而必須用無(wú)菌平衡鹽溶液和同樣濃度的酚紅配一套標(biāo)準(zhǔn)樣,放在與制備培養(yǎng)基相同的瓶子中。(2)緩沖能力碳算鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低、對(duì)培養(yǎng)物有營(yíng)養(yǎng)作用,因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。在pH值條件下的緩沖能力差。(3)滲透壓多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有很寬的耐受范圍,一般常用冰點(diǎn)降低或蒸汽壓升高測(cè)定。如果自己配培養(yǎng)基,可通過(guò)測(cè)定滲透壓防止稱(chēng)量和稀釋等造成的誤差。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn):可連接電腦進(jìn)行打印。
培養(yǎng)基配置原則:控制pH條件,培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿(mǎn)足不同類(lèi)型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類(lèi)微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的很適pH條件各不相同,一般來(lái)講,細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng),酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是,在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過(guò)程中,由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制,往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。培養(yǎng)基成份的混合與溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。山西自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器內(nèi)部的管道和容器可以更換,方便移除和清洗。上海培養(yǎng)基制備器售后
常用培養(yǎng)基的制備及注意事項(xiàng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馀囵B(yǎng)基的配制原理;掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟;了解常見(jiàn)滅菌、清毒基本原理及方法;掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過(guò)濾除菌的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基也有不同的種類(lèi)和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用較普遍和較普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,有時(shí)又稱(chēng)為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的較基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過(guò)升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。上海培養(yǎng)基制備器售后