血清培養(yǎng)基主要問題:血清的成份可能有幾百種之多,對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認(rèn)識,這給研究工作帶來許多困難。血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。對大多數(shù)細(xì)胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進某些細(xì)胞的生長(成纖維細(xì)胞)同時抑制另一類細(xì)胞生長(表皮細(xì)胞)。培養(yǎng)基的實驗室制備:正確制備培養(yǎng)基時微生物檢驗的較基礎(chǔ)步驟之一。重慶Systec培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備操作步驟:(一)準(zhǔn)確稱量試劑根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。(二)校正pH值將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標(biāo)記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1NNaOH和1NHCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。(三)過濾將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。(四)分裝將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準(zhǔn)備滅菌。(五)滅菌培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,但細(xì)菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到徹底滅菌的目的。重慶Systec培養(yǎng)基制備器一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。
培養(yǎng)基的滅菌:一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中,如無特殊規(guī)定,即可用此法滅菌。某些畏熱成分,如糖類,應(yīng)另行配成20%或更高的濃液,以過濾或間歇滅菌法消毒,以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和物品等則應(yīng)以無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的培養(yǎng)基中。瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出,冷至55℃-60℃時,擺置成適當(dāng)斜面,待其自然凝固。
干粉顆粒微生物培養(yǎng)基儲存條件:通常情況下,干粉培養(yǎng)基和顆粒培養(yǎng)基產(chǎn)品,在室溫干燥避光的儲存環(huán)境中,并注意密封存放,避免產(chǎn)品陽光直射,室內(nèi)濕度與溫度太高,如不注意密封情況,顆粒粉末在會有結(jié)塊和受潮的現(xiàn)象,所以使用后一定要擰緊蓋子,注意防潮。關(guān)于儲存時長,只要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基廠家的標(biāo)簽要求存放,未開封的培養(yǎng)基可保存兩至三年。我們平常使用時,干粉沒必要放在冰箱里,但如果在制備當(dāng)天打開培養(yǎng)基后沒有用完,建議將其存放在冰箱中,減少受潮問題但不要放置太多天??傊疀]有開封的干粉、顆粒培養(yǎng)基存放在陰涼干燥處即可。培養(yǎng)基制備器通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。
固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基的過濾澄清,液體培養(yǎng)基必須一定澄清,瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無明顯沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法,濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi),裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個雞蛋的蛋白,強力振搖3~5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。培養(yǎng)基的分裝,培養(yǎng)基的分裝,應(yīng)按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。制備培養(yǎng)基的操作要點:固體培養(yǎng)基在實際中用得十分普遍。內(nèi)蒙古進口培養(yǎng)基制備器
脫水培養(yǎng)基,又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基,指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。重慶Systec培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的制備原則和要求:培養(yǎng)基是根據(jù)各類微生物生長繁殖的需要,用人工方法把多種物質(zhì)混合而成的營養(yǎng)物。一般用來分離、培養(yǎng)菌類。常用的培養(yǎng)基有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和厭氧培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時,應(yīng)掌握如下原則和要求:(一)培養(yǎng)基必須含有細(xì)菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。所用的化學(xué)藥品必須純凈,稱取的份量務(wù)必準(zhǔn)確。(二)培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長要求。按各種培養(yǎng)基要求準(zhǔn)確測定調(diào)節(jié)pH值。多數(shù)細(xì)菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。重慶Systec培養(yǎng)基制備器