平板的制備和儲存:傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少為3mm(直徑90mm的平皿,通常要加入18mL?20mL瓊脂培養(yǎng)基)。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存,或者培養(yǎng)時間超過48h或培養(yǎng)溫度高于40℃,則需要傾注更多的培養(yǎng)基。凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用或存放于暗處和(或)5±3℃冰箱的密封袋中,以防止培養(yǎng)基成分的改變。在平板底部或側(cè)邊做好標記,標記的內(nèi)容包括名稱、制備日期和(或)有效期。也可使用適宜的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)進行標記。將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生,平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。對于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基,應(yīng)先對瓊脂表面進行干燥:揭開平皿蓋,將平板倒扣于烘箱或培養(yǎng)箱中(溫度設(shè)為25~50℃);或放在有對流的無菌凈化臺中,直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按照廠商提供的說明使用。強力磁力攪拌培養(yǎng)基在內(nèi)腔里混合的均勻性得到確保,并避免凝結(jié)。陜西自動攪拌培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)平板培養(yǎng)基是被用于獲得微生物純培養(yǎng)的很常用的固體培養(yǎng)基形式,它是冷卻凝固后的固體培養(yǎng)基在無菌培養(yǎng)皿中形成的培養(yǎng)基固體平面,常被簡稱為培養(yǎng)平板。也叫平面培養(yǎng)基、平皿培養(yǎng)基。平板培養(yǎng)基常用于單孢分離,測定菌絲生長速度,觀察菌落的形態(tài),拮抗實驗,測定接種空間雜菌數(shù)。平板培養(yǎng)基制作方法如下:將培養(yǎng)皿洗凈、干燥,使各培養(yǎng)皿蓋方向一致,用牛皮紙包好,或放入特制鐵罐內(nèi),注明皿蓋的方向。高壓滅菌或干燥滅菌后備用。取剛滅菌后尚未凝固的培養(yǎng)基置于無菌箱或超凈工作臺內(nèi),先左手持三角瓶,右手反轉(zhuǎn)手掌用中指和無名指撥出棉塞或硅膠賽(或不翻轉(zhuǎn)手掌用小指和手掌撥出棉塞),同時將三角瓶轉(zhuǎn)換至右手,而后左手拿平皿,以大拇指和中指將皿蓋打開一縫,至瓶口剛好伸人。三角瓶口經(jīng)火焰燒灼后,傾入滅菌或溶化、冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基約15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上,以免沾染皿壁),迅速蓋好皿蓋,置于桌上輕輕旋轉(zhuǎn)平皿,使培養(yǎng)基均勻分布于整個平皿底部,冷凝后即為平板培養(yǎng)基。有時凝固后的培養(yǎng)基表面有冷凝水,可將平皿蓋打開倒置于37℃溫箱,除去冷凝水,否則將影響平板分離培養(yǎng)效果。為防止冷凝水過多,也可將培養(yǎng)基冷卻至45~50°C再倒平板。北京瓊脂培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。
培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn)醫(yī)學(xué),需過濾成清晰透明后方可使用,常用的過濾方法如下:1.液體培養(yǎng)基:液體培養(yǎng)基必須清晰,以便觀察細菌的生長情況,常用濾紙過濾,亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養(yǎng)基用1個雞蛋白)在100℃加熱后保持60~70℃,40~60分鐘,使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。2.固體培養(yǎng)基:如系瓊脂培養(yǎng)基,于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾;亦可用自然沉淀法,即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi),以高壓(103.43kPa)蒸汽融化15分鐘后,靜置高壓鍋內(nèi)過夜,次日將瓊脂傾出,用刀將底部沉渣切去,再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基。
馬鈴薯培養(yǎng)基的分裝:1.根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。2.瓊脂斜面分裝量為試管容量的1/5,滅菌后須趁熱放置成斜面,斜面長約為試管長的2/3。3.半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長的1/3,滅菌后直立凝固待用。4.高層瓊脂分裝量約為試管的1/3,滅菌后趁熱直立,待冷后凝固待用。5.液體培養(yǎng)基分裝于試管中,約是試管長度的1/3。6.瓊脂平板:將滅菌(或加熱融化)后的培養(yǎng)基冷至50℃左右,以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi),內(nèi)徑225px的平皿傾注培養(yǎng)基約13~15ml,輕搖平皿底,使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部,待凝固后即成,傾注培養(yǎng)基時,切勿將皿蓋全部啟開,以免空氣中塵埃及細菌落入新制成的平板培養(yǎng)基(簡稱平板),表面水分較多,不利于細菌的分離,通常應(yīng)將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用。全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:溫度探頭測量培養(yǎng)基實際溫度,控溫很準。
培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項:1.培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂.較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后.還應(yīng)進行一次檢查。2.培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細菌不易生長。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化.也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動,以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。培養(yǎng)基pH值的調(diào)正:pH因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化。北京瓊脂培養(yǎng)基制備器
全自動培養(yǎng)基制備儀主要特點:力攪拌,確保培養(yǎng)基受熱均勻,營養(yǎng)均一。陜西自動攪拌培養(yǎng)基制備器
加棉塞:分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。制作棉塞時,要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與姆指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞。棉塞作成后,應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶內(nèi),上端露出少許棉花便于拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札,準備滅菌。陜西自動攪拌培養(yǎng)基制備器