改良阿須貝(Ashby)無氮瓊脂培養(yǎng)基

培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有水、氮源、無機(jī)鹽（包括微量元素）、碳源、生長(zhǎng)因子（維生素、氨基酸、堿基、色素和血清等）等。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對(duì)一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)間的貯存，必須放在3-6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，均改制成粉末。培養(yǎng)基也有不同的形態(tài)，可以是液體、半固體或固體形式。改良阿須貝(Ashby)無氮瓊脂培養(yǎng)基

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞培養(yǎng)基是不可或缺的，細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清，以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。而除了血清之外，部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol）等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素，而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇，不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異，需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。采樣吸收液1-GVPC液體培養(yǎng)基生長(zhǎng)細(xì)胞需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、微量元素和維生素等。

細(xì)菌培養(yǎng)基之面粉瓊脂培養(yǎng)基：面粉60g，瓊脂20g，水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500ml，放在文火上煮30分鐘。另取500ml水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。微藻培養(yǎng)基，BG-11培養(yǎng)基：NaNO3 1.5g，K2HPO4 ·3H2O0.04g，MgSO4·7H2O0.075g，CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid （檸檬酸）0.006g，F(xiàn)erric ammonium citrate（檸檬酸鐵銨0.006g，EDTA (dinatrium-salt) 0.001g，Na2CO3 0.02g，A5 + Co solution * （A5溶液1000×）1ml Distilled Water （蒸餾水）919ml。

長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí)，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變（一般使pH降低），可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。培養(yǎng)基根據(jù)其組成、用途、酸堿度等不同因素分類，如營(yíng)養(yǎng)瓊脂、LB培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基等。

總體而言，所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源，但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類型復(fù)雜，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物，因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以（或應(yīng)該）由簡(jiǎn)單的無機(jī)物組成。例如，培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌（Thiobacillus thiooxdans）的培養(yǎng)基組成見表3.9。在該培養(yǎng)基配制過程中并未專門加入其他碳源物質(zhì)，而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。有些培養(yǎng)基需要添加血清或其它富含蛋白質(zhì)的物質(zhì)以促進(jìn)生長(zhǎng)。ATYP瓊脂

培養(yǎng)基種類繁多，根據(jù)需求選擇適合的培養(yǎng)基對(duì)于成功的微生物培養(yǎng)至關(guān)重要。改良阿須貝(Ashby)無氮瓊脂培養(yǎng)基

培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。改良阿須貝(Ashby)無氮瓊脂培養(yǎng)基

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