Miller培養(yǎng)基

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺（L-Glutamine）是細(xì)胞生長(zhǎng)的必須氨基酸，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中狀態(tài)不穩(wěn)定，它的降解速率隨保存時(shí)間，保存溫度及保存環(huán)境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺（L-alanyl-L-glutamine）是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品，其在水溶液中穩(wěn)定性高，即可保持長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的營(yíng)養(yǎng)供給，也降低了分解產(chǎn)物造成的細(xì)胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液（L-alanyl-L-glutamineslution）可作為哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。與谷氨酰胺相比，L-丙胺酰-谷氨酰胺不會(huì)自行降解成氨而導(dǎo)致細(xì)胞毒性，作為添加物培養(yǎng)條件更加可控，可有效提高細(xì)胞活力。人工合成基因可以在特定的培養(yǎng)基中得到表達(dá)，需要選擇含有適當(dāng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。Miller培養(yǎng)基

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)必需的溶液，平衡鹽水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）細(xì)胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素，每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。常用的動(dòng)物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來(lái)源少，價(jià)格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因?yàn)椴溉楹蟮男∨Ｑ逯锌赡芎懈鼜?fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。七葉苷培養(yǎng)基自制培養(yǎng)基需要小心配比，防止成分誤差或者污染。

總體而言，所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子、水及能源，但由于微生物營(yíng)養(yǎng)類型復(fù)雜，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的，因此首先要根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物，因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以（或應(yīng)該）由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成。例如，培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌（Thiobacillus thiooxdans）的培養(yǎng)基組成見(jiàn)表3.9。在該培養(yǎng)基配制過(guò)程中并未專門加入其他碳源物質(zhì)，而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。

培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。常見(jiàn)的培養(yǎng)基有LB培養(yǎng)基，YPD培養(yǎng)基，M9培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基等。

細(xì)菌培養(yǎng)基之面粉瓊脂培養(yǎng)基：面粉60g，瓊脂20g，水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500ml，放在文火上煮30分鐘。另取500ml水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，補(bǔ)充水分，調(diào)整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。微藻培養(yǎng)基，BG-11培養(yǎng)基：NaNO3 1.5g，K2HPO4 ·3H2O0.04g，MgSO4·7H2O0.075g，CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid （檸檬酸）0.006g，F(xiàn)erric ammonium citrate（檸檬酸鐵銨0.006g，EDTA (dinatrium-salt) 0.001g，Na2CO3 0.02g，A5 + Co solution * （A5溶液1000×）1ml Distilled Water （蒸餾水）919ml。

培養(yǎng)基類型和配方可以根據(jù)需要進(jìn)行定制，以滿足特定的實(shí)驗(yàn)需求。胡蘿卜培養(yǎng)基 胡蘿卜浸出液葡萄糖培養(yǎng)基

在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)通常還需要添加藥物，以防止細(xì)菌污染。Miller培養(yǎng)基

HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡，以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液，如果只是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí)，需要注意一點(diǎn)：新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過(guò) 0.10um 或 0.22um 濾膜過(guò)濾時(shí)，溶液的pH 還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。Miller培養(yǎng)基

上海瑞楚生物科技有限公司是我國(guó)培養(yǎng)基，菌種，標(biāo)準(zhǔn)品，酶專業(yè)化較早的有限責(zé)任公司（自然）之一，公司成立于2012-11-29，旗下瑞楚生物，已經(jīng)具有一定的業(yè)內(nèi)水平。公司主要提供從事生物科技、農(nóng)業(yè)科技、環(huán)?？萍碱I(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù)，化工原料及產(chǎn)品（除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、民用baozha物品、易制毒化學(xué)品），日用百貨，金屬制品，塑料制品，儀器儀表，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備（除醫(yī)療器械）銷售，會(huì)務(wù)服務(wù)，從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)等。等領(lǐng)域內(nèi)的業(yè)務(wù)，產(chǎn)品滿意，服務(wù)可高，能夠滿足多方位人群或公司的需要。瑞楚生物將以精良的技術(shù)、優(yōu)異的產(chǎn)品性能和完善的售后服務(wù)，滿足國(guó)內(nèi)外廣大客戶的需求。