胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

培養(yǎng)基的種類有哪些？鑒別培養(yǎng)基：利用細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，觀察細(xì)菌生長過程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物，通過指示劑的反應(yīng)不同來鑒別細(xì)菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動力-吲哚-尿素（MIU）培養(yǎng)基等。選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入抑制劑，去抑制標(biāo)本中的雜菌生長，有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長。例如培養(yǎng)腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門菌、志賀菌容易分離到。液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強(qiáng)的緩沖劑，能使細(xì)胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強(qiáng)。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細(xì)胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)的過程中能用到。TGY瓊脂培養(yǎng)基在培養(yǎng)細(xì)胞時通常還需要添加藥物，以防止細(xì)菌污染。

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺（L-Glutamine）是細(xì)胞生長的必須氨基酸，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源，參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中狀態(tài)不穩(wěn)定，它的降解速率隨保存時間，保存溫度及保存環(huán)境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺（L-alanyl-L-glutamine）是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品，其在水溶液中穩(wěn)定性高，即可保持長時間穩(wěn)定的營養(yǎng)供給，也降低了分解產(chǎn)物造成的細(xì)胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液（L-alanyl-L-glutamineslution）可作為哺乳動物貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。與谷氨酰胺相比，L-丙胺酰-谷氨酰胺不會自行降解成氨而導(dǎo)致細(xì)胞毒性，作為添加物培養(yǎng)條件更加可控，可有效提高細(xì)胞活力。

胰島素（Insulin）作用普遍，包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進(jìn)細(xì)胞生長等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對細(xì)胞的作用，進(jìn)而引起組織乃至機(jī)體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細(xì)胞水平的作用分為三大類：代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。胰島素對細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過其與細(xì)胞膜上的胰島素受體（Insulin receptor, IR）相互作用而介導(dǎo)，而胰島素對細(xì)胞的促生長作用則是通過其與細(xì)胞膜上胰島素的樣生長的因子受體（IGF Receptor, IG）相互作用而介導(dǎo)的。在無血清細(xì)胞培養(yǎng)液中，常添加胰島素來維持細(xì)胞生長，調(diào)節(jié)細(xì)胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存，同時抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。生長細(xì)胞需要的營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、微量元素和維生素等。

培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響？一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時，細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。NaHCO3的作用：培養(yǎng)基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng)，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度（5%） ，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值。NEAA：非必須氨基酸，NEAA（非必需氨基酸） 是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養(yǎng)基不同，NEAA 也有不同的種類，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。半固態(tài)培養(yǎng)基是一種介于液態(tài)培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基之間的混合形式，常用于篩選微生物菌株。假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基P基礎(chǔ)

好氧菌需要富含氧氣和富含葡萄糖的培養(yǎng)基，而厭氧菌則需要采用無氧培養(yǎng)技術(shù)。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ)，向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，鐵鹽100×母液20mL，維生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培養(yǎng)基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水，加入40g蔗糖后攪拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0。加入14g瓊脂，將鋁鍋置于電爐上，攪拌加熱使瓊脂完全溶化，然后用蒸餾水定容至終體積2L，繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）基礎(chǔ)

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