石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-08

如何高效率實(shí)現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染:陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑,以其適用宿主范圍廣,操作簡便,對(duì)細(xì)胞毒性小,轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。脂質(zhì)體(liposome)是一種人工膜,在水相中形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的球形封閉囊泡。脂質(zhì)體可以和帶負(fù)電荷的核酸結(jié)合后重新形成復(fù)合物,當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時(shí),通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體(endosomes)進(jìn)入細(xì)胞,通過緩沖液的作用以及脂質(zhì)與內(nèi)體膜融合,增大內(nèi)體的內(nèi)部滲透壓,使內(nèi)體結(jié)構(gòu)破壞,釋放出核酸。隨后DNA復(fù)合物被釋放進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)。對(duì)于普通細(xì)胞系,一般的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法較重要的就是防止其毒性,因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例,細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素,通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對(duì)于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要。因?yàn)镈NA攝入效率和表達(dá)水平在不同實(shí)驗(yàn)中差異較大,實(shí)驗(yàn)必須很小心。石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒:1.設(shè)置陰性和陽性對(duì)照:一般在轉(zhuǎn)染后24-48h,靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)??梢罁?jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?4-48h后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測等實(shí)驗(yàn)。2.轉(zhuǎn)染后效率的檢測方法:觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞熒光情況;qPCR驗(yàn)證;WB檢測敲減或過表達(dá)蛋白。3. 轉(zhuǎn)染效率低,可采取以下兩種方法:1 )復(fù)轉(zhuǎn)染,即轉(zhuǎn)染后12-24h再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,前提是該細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的耐受性較好,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少。2 )通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞,前提是該質(zhì)粒帶有物品抗性的基因。4. 電轉(zhuǎn)時(shí),不同的細(xì)胞需要的電壓是不一樣的,需要做預(yù)實(shí)驗(yàn),摸索較佳條件。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞而言,較佳電壓位于250-1250v/cm。電擊后,應(yīng)該將DNA和細(xì)胞混合液在室溫下放置10min,使細(xì)胞恢復(fù)損傷。鄭州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家其可降解性對(duì)體內(nèi)應(yīng)用也具有重要的意義。

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如何高效率實(shí)現(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染:DNA轉(zhuǎn)染導(dǎo)入細(xì)胞胞漿內(nèi)的DNA 不能穿過細(xì)胞核的核膜("核屏障")。在細(xì)胞有絲分裂過程中核膜溶解,DNA進(jìn)入細(xì)胞核才有可能。為此,細(xì)胞處于分裂期對(duì)DNA轉(zhuǎn)染是至關(guān)重要的,并且處于分裂期的細(xì)胞比例必須盡可能大才能實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染。DNA轉(zhuǎn)染機(jī)制示意圖如下所示:轉(zhuǎn)染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)對(duì)于RNA轉(zhuǎn)染是沒有"核屏障"的,因?yàn)镽NA不需要進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng),因此細(xì)胞分裂對(duì)它沒有影響。轉(zhuǎn)染試劑的選擇理想的轉(zhuǎn)染試劑選擇可以使您的實(shí)驗(yàn)如虎添翼!真核細(xì)胞的先天免疫系統(tǒng),使它們能夠檢測外來物質(zhì)如脂多糖、細(xì)菌或細(xì)菌核酸和蛋白質(zhì),并克制潛在病原體的入侵。此外,細(xì)胞通過信使分子向臨近細(xì)胞傳遞發(fā)現(xiàn)有害物質(zhì)的信號(hào)。因此,這些臨近細(xì)胞甚至無需接觸病原體即可采取防御方式。這種細(xì)胞先天免疫系統(tǒng)也是轉(zhuǎn)染成功的一個(gè)障礙。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素:1.細(xì)胞密度一般來說,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%~80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率,過低或過高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果。2.細(xì)胞生長狀態(tài)這點(diǎn)非常關(guān)鍵,很多時(shí)候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此,為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性,應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系,并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性。3.細(xì)胞種類不同細(xì)胞種類的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染時(shí)所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的,不能一種體系用在所有類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。

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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng):轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法:電穿孔法、顯微注射和基因;化學(xué)介導(dǎo)方法:如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法:有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,則各有其特點(diǎn)。需要指出的一點(diǎn),無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),要獲得較優(yōu)的轉(zhuǎn)染結(jié)果,可能都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,從細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長狀態(tài)到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞而言,均需要在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在鋪板,第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染。廣州細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷價(jià)

總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒:1. 選擇傳代次數(shù)較低并處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞而言,均需要在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在鋪板,第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染,48h后收集細(xì)胞進(jìn)行功能檢測。對(duì)于原代細(xì)胞,可用促有絲分裂刺激物進(jìn)行細(xì)胞活化。2.對(duì)于貼壁細(xì)胞,一般要求在轉(zhuǎn)染前一日,用胰酶處理為單細(xì)胞懸液,重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,較好在轉(zhuǎn)染前4小時(shí)換一次新鮮培養(yǎng)液。3.支原體污染會(huì)嚴(yán)重降低細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率,且支原體不會(huì)像細(xì)菌污染那么明顯,因而轉(zhuǎn)染前可用環(huán)丙沙星處理細(xì)胞以除去支原體。4.細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)需要一定的細(xì)胞密度,以70-90%(貼壁細(xì)胞)或2×106-4×106細(xì)胞/ml(懸浮細(xì)胞)為宜。石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家好

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與原代細(xì)胞相關(guān)的擴(kuò)展資料:

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原代細(xì)胞(primary culture cell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、**藥物的研究等。原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用,市場前景廣闊。