細(xì)胞外基質(zhì):為了獲得體內(nèi)衍生的仿生基質(zhì),從心臟末端抽取全血,離心后取上層血液與預(yù)提取的EVs混合,進(jìn)行自凝集。通過壓縮將自凝混合物制備成一定形狀的血源性水凝膠(AH)。通過SEM觀察發(fā)現(xiàn)EVs附著在纖維上,因而說明AH與Evs可成功結(jié)合(圖3A,B)。檢測ALP活性和鈣濃度發(fā)現(xiàn)兩者都隨時(shí)間增加,持續(xù)到AH降解完畢,說明含EV的AH具有緩慢、漸進(jìn)的釋放特性(圖3C,D)。然后建立共培養(yǎng)體系,比較AH、AH+E-EVs、AH+L-EVs、AH+C-EVs(AH與E-EVs、L-EVs復(fù)合)對(duì)BMSCs活力、增殖、遷移、成骨分化的影響(圖3E-K),結(jié)果表明AH與E-EVs具有協(xié)同作用,可促進(jìn)BMSCs的增殖和遷移,并且AH與E-Evs的聯(lián)合應(yīng)用可以促進(jìn)早期骨形成。多細(xì)胞生物,不光由細(xì)胞組成,還包括分布于細(xì)胞外空間的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。無錫濟(jì)南細(xì)胞外基質(zhì)膠
蛋白聚糖在細(xì)胞外基質(zhì)中的功能是什么:蛋白聚糖或透明質(zhì)酸-蛋白聚糖復(fù)合物構(gòu)成了細(xì)胞外基質(zhì)的基質(zhì),由于它們是高度酸性的,且?guī)ж?fù)電荷,因此能夠結(jié)合大量的陽離子,這些陽離子又可結(jié)合大量的水分子,這樣,蛋白聚糖形成了多孔的、吸水的膠狀物,如同包裝材料,填充在細(xì)胞外基質(zhì)中。蛋白聚糖的這種性質(zhì),使細(xì)胞表面具有較大的可塑性,從而具有抗擠壓能力,對(duì)細(xì)胞起保護(hù)作用。由于透明質(zhì)酸以可溶的形式游離存在,所以在細(xì)胞外體液和滑液(synovialfluid)中透明質(zhì)酸的濃度很高,其結(jié)果提高了體液和滑液的粘度和潤滑性。單個(gè)的蛋白聚糖和透明質(zhì)酸-蛋白聚糖復(fù)合物直接與膠原纖維連接形成動(dòng)物細(xì)胞外的纖維-網(wǎng)絡(luò)(fiber-network)結(jié)構(gòu),不同類型的膠原和不同類型的蛋白聚糖連接形成不同的纖維-網(wǎng)絡(luò),對(duì)于提高細(xì)胞外基質(zhì)的連貫性起關(guān)鍵作用。此外,蛋白聚糖還可作為細(xì)胞粘著的暫時(shí)性或長久性的位點(diǎn)。暫時(shí)性的粘著發(fā)生在胚胎發(fā)育中,對(duì)于單個(gè)細(xì)胞及細(xì)胞層的移動(dòng)具有重要作用。另外,蛋白聚糖對(duì)于細(xì)胞分化也十分重要,同時(shí)也與細(xì)胞變有關(guān)。珠海細(xì)胞外基質(zhì)膠供應(yīng)商細(xì)胞外基質(zhì)中的纖粘蛋白主要由成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等分泌并附著在細(xì)胞表面。
纖維黏連蛋白:纖維黏連蛋白(fibronectin,F(xiàn)N,又稱冷不溶球蛋白CIG、轉(zhuǎn)化敏感性細(xì)胞外巨蛋白質(zhì)LETS、成纖維細(xì)胞表面抗原FSA、調(diào)理素-α2糖蛋白、血清細(xì)胞粘合因子、纖連素、纖維連接蛋白、纖維結(jié)構(gòu)蛋白、纖連蛋白、纖黏連蛋白)是發(fā)現(xiàn)較早的細(xì)胞外基質(zhì)非膠原糖蛋白,某些患者血漿纖維黏連蛋白升高,腹水中的纖維黏連蛋白濃度可協(xié)助鑒別性腹水與非性腹水(兩者相差10倍),纖維黏連蛋白促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用對(duì)于細(xì)胞較正常細(xì)胞更強(qiáng),某些細(xì)胞對(duì)纖維黏連蛋白的趨化性可能與的侵襲、轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)移時(shí)的部位定位有關(guān)。
骨膜來源的細(xì)胞外基質(zhì)水凝膠通過早期免疫調(diào)節(jié)及增強(qiáng)血管和骨生成促進(jìn)骨修復(fù):骨愈合包括早期炎癥免疫調(diào)節(jié)、血管生成、成骨分化和生物礦化等過程,干預(yù)其中的任一過程都可能阻礙骨修復(fù)。在復(fù)雜和嚴(yán)重的骨損傷部位,大量的促炎因子的存在會(huì)誘發(fā)促炎反應(yīng)。長期的促炎反應(yīng)會(huì)阻礙巨噬細(xì)胞從M1到M2的轉(zhuǎn)變導(dǎo)致骨再生延遲。因此,在骨損傷早期通過調(diào)控M1向M2的轉(zhuǎn)變來適時(shí)終止促炎反應(yīng)是骨愈合成功的前提。近日,浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院范順武和林賢豐教授課題組制備了一種骨膜來源的細(xì)胞外基質(zhì)(PEM)水凝膠,并評(píng)價(jià)了它們?cè)诠切迯?fù)過程中不同時(shí)期的調(diào)節(jié)作用。細(xì)胞外基質(zhì)的主要類型及功能:蛋白聚糖,由蛋白質(zhì)和多糖共價(jià)形成,具有高度親水性。
細(xì)胞外基質(zhì)氨基聚糖與蛋白聚氨基聚糖(glycosaminoglycan,GAG)GAG是由重復(fù)二糖單位構(gòu)成的無分枝長鏈多糖。其二糖單位通常由氨基已糖(氨基葡萄糖或氨基半乳糖)和糖醛酸組成,但硫酸角質(zhì)素中糖醛酸由半乳糖代替。氨基聚糖依組成糖基、連接方式、硫酸化程度及位置的不同可分為六種,即:透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸乙酰肝素、肝素、硫酸角質(zhì)素。透明質(zhì)酸(hyaluronicacid,HA)是較少不發(fā)生硫酸化的氨基聚糖,其糖鏈特別長。氨基聚糖一般由不到300個(gè)單糖基組成,而HA可含10萬個(gè)糖基。在溶液中HA分子呈無規(guī)則卷曲狀態(tài)。如果強(qiáng)行伸長,其分子長度可達(dá)20μm。腎小球硬化后,分泌合成大量的不易被降解的膠原。寧波細(xì)胞外基質(zhì)膠生產(chǎn)廠家
細(xì)胞外基質(zhì)調(diào)節(jié)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)行為。此外,它能隔離多種細(xì)胞生長因子。無錫濟(jì)南細(xì)胞外基質(zhì)膠
涉及纖連蛋白基質(zhì)組裝的信號(hào)傳導(dǎo)途徑:原纖維形成檢測(貨號(hào):FNR01,F(xiàn)NR02,F(xiàn)NR03)與其他可以在生理?xiàng)l件下自動(dòng)聚合的ECM組分不同,F(xiàn)ibronectin的組裝是一種依賴細(xì)胞的過程。了解FN組裝所涉及的機(jī)制以及這些與細(xì)胞,纖維化和免疫反應(yīng)之間的相互作用可能揭示了調(diào)控異常組織修復(fù)過程的療法的未來發(fā)展目標(biāo)。同樣,組織工程很大程度上依賴于控制細(xì)胞外基質(zhì)形成的速率和模式的能力。Cytoskeleton熒光標(biāo)記的Fibronectin可用于檢測原纖維形成。熒光纖連蛋白(FNR01和FNR02該方法涉及通過摻入熒光纖連蛋白來對(duì)纖維絲形成進(jìn)行熒光示蹤(17),通過向細(xì)胞培養(yǎng)基中加入TRITC標(biāo)記的Fibronectin(FNR01)或HiLyte488標(biāo)記的Fibronectin(FNR02),可以觀察到可溶性Fibronectin向細(xì)胞表面不溶纖維絲的轉(zhuǎn)化,摻入的纖連蛋白的水平可以通過熒光顯微鏡觀察和定量(18)。無錫濟(jì)南細(xì)胞外基質(zhì)膠