南昌正規(guī)無血清細胞凍存液廠家

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。細胞凍存的原理：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：通用型，適用于凍存各種細胞系、原代細胞。南昌正規(guī)無血清細胞凍存液廠家

無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項：1.將分裝好的細胞凍存管，直接置于-80度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可備注：1、凍存過程中，第2步在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷。2、細胞凍存管一定要保證完全密封，否則在復蘇過程中有可能會炸（1）提前開啟水浴鍋，溫度調(diào)節(jié)到37（2）將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中融化，盡量1min融化，時間越短，對細胞影響越小。（3）將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻，（如細胞冷凍保存液為500ul，則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中，如細胞冷凍保存液位1ml，則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。）（4）混勻后立即離心，800轉(zhuǎn)，3min即可離心結(jié)束后棄上清，加入預溫的新鮮培養(yǎng)液。（5）混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定，通常為5%【注意事項】細胞系凍存密度備注正常人成纖維細胞1～310cells/ml雜交瘤細胞1～310cells/ml某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后死去。杭州無血清細胞凍存液報價無血清細胞凍存液：一些保護劑，易于穿透細胞，避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞。

無血清細胞凍存液，細胞凍存與復蘇后，平均活細胞回收比例超過80%。與含血清凍存液比較，BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表，BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養(yǎng)的細胞凍存。復蘇細胞：1.將細胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于37度水浴快速溶解回溫。此時可準備培養(yǎng)基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。2.于生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復沖融，使細胞團塊化凍。3.先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細胞。4.倒去上清液，以新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。5.隔天更換新鮮培養(yǎng)基，并觀察細胞存活狀況。

胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結(jié)的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：因不含血清，批次間差異小。

無血清細胞凍存液使用方法：選擇凍存處于對數(shù)生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1）按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2）按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3）取相當于所需細胞數(shù)的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4）加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5）將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6）直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱，長期冷凍保存。無血清凍存液注意事項：凍存液加入細胞后，請盡快放入-80C冰箱凍存。正規(guī)無血清細胞凍存液廠家供應

含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞。南昌正規(guī)無血清細胞凍存液廠家

凍存細胞復蘇方法：1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4.清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6.鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。南昌正規(guī)無血清細胞凍存液廠家