蘇州Co IP免疫沉淀磁珠多少錢

來源： 發(fā)布時間：2024-06-02

免疫沉淀Co-IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構  (直徑 50-150 μm)  可以結合抗體  (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
免疫沉淀技術IP的實驗設計。蘇州Co IP免疫沉淀磁珠多少錢

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免疫沉淀RIP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構  (直徑 50-150 μm)  可以結合抗體  (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
蛋白免疫沉淀免疫沉淀和免疫共沉淀的區(qū)別？

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免疫沉淀實驗步驟：
1. 樣品制備
a. 懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
b. 貼壁細胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞兩遍；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
4. 后續(xù)：磁珠預處理——抗體吸附——抗原結合反應——抗體洗脫

Co-IP（免疫共沉淀）技術主要用于研究蛋白質之間的相互作用，其實驗設計如下：
1. 樣品準備：Co-IP實驗通常有兩種，一種是內源性蛋白相互作用驗證，一種是非內源性蛋白相互作用驗證。內源性相互作用通過質粒共轉染的方式將兩種蛋白轉染至同一細胞內表達；非內源性相互作用則是將含有靶蛋白的組織進行預處理及細胞裂解獲得細胞裂解液。
2. 沉淀誘餌蛋白：利用磁珠偶聯(lián)抗體沉淀誘餌蛋白。在樣品中加入磁珠偶聯(lián)抗體，抗體會與誘餌蛋白結合，利用磁鐵將磁珠拉下，同時誘餌蛋白會一起被沉淀出來。
3. SDS-PAGE及WB檢測：得到沉淀后，需要驗證沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE將蛋白復合物分離，隨后利用WB檢測是否存在靶蛋白。
4. 實驗對照設置：為了避免“假陽性”，需要設置正確的對照，包括陰性對照和陽性對照（Input組）。Input組為直接利用抗體對細胞裂解液進行WB檢測，驗證細胞裂解液中存在蛋白。
5. 結果真實性：確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白。使用單克隆抗體有助于避免污染的發(fā)生。
免疫沉淀抗體的選擇？

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免疫沉淀技術的實驗方法通常包括以下步驟：
1. 樣本準備
2. 細胞裂解：使用裂解緩沖液（含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質降解）裂解細胞，釋放蛋白質。
3. 蛋白質濃度測定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃度。
4. 抗體預處理：如果使用預固定的抗體，需先將抗體固定在固相支持物上，如瓊脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反應：將裂解液與特異性抗體（固定或未固定）混合，并在4°C下緩慢搖晃孵育過夜，以允許抗體與目標蛋白質充分結合。
6. 固相支持物的回收：對于未固定的抗體，加入與抗體特異性結合的蛋白A或蛋白G結合的固相支持物。
7. 洗滌：去除未結合的蛋白質和雜質，通常需要多次洗滌固相支持物。
8. 洗脫：使用適當?shù)南疵摼彌_液（如加熱的SDS加載緩沖液或酸性緩沖液）從固相支持物上洗脫免疫復合物。
9. 后續(xù)分析：對洗脫的蛋白質進行SDS-PAGE電泳、Western Blot、質譜分析等，以進一步分析目標蛋白質。
10. 對照實驗：包括正對照（已知能沉淀目標蛋白的抗體）和負對照（非特異性抗體或無抗體）以驗證實驗的特異性。
免疫沉淀ChIP技術選瓊脂糖珠還是磁珠？廣州anti Flag免疫沉淀磁珠哪個公司好用

免疫沉淀IP抗體的選擇？蘇州Co IP免疫沉淀磁珠多少錢

染色質免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術是目前公認的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達機制研究中不可或缺的技術之一。
它的基本原理是在活細胞狀態(tài)下，固定蛋白質-DNA（染色質）復合物，并將其切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過免疫學方法（抗體親和）沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質與 DNA 相互作用的信息。
這項技術通過蛋白質與DNA互作來分析目標基因活性以及已知蛋白質的靶基因，被廣泛應用于體內轉錄調控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結合方面的研究。該技術常與DNA芯片和分子克隆技術相結合。
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