膜片鉗技術(shù)是一種用于研究生物細胞膜離子通道的實驗方法。它通過在細胞膜上形成小孔,從而對細胞膜的離子通道進行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實驗中,研究人員通常會先將細胞膜上的脂質(zhì)雙層通過特殊設(shè)備進行穿刺,形成一個小孔。然后,他們將一個玻璃微電極插入這個小孔中,以接觸并測量細胞膜內(nèi)部的電位變化。這個玻璃微電極的端非常細,不會對細胞膜產(chǎn)生太大的干擾。通過膜片鉗技術(shù),科學家可以精確地測量離子通道的活動,從而了解離子通道在細胞生理學中的作用。例如,他們可以測量離子通道在不同刺激下如何開啟或關(guān)閉,以及這些變化如何影響細胞的電活動和化學信號傳遞。此外,膜片鉗技術(shù)還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點。通過觀察藥...
實驗溶液浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容,這關(guān)系到封接的容易程度、細胞存活狀態(tài)及膜電位的狀態(tài)等。在實驗記錄過程中,尤其是神經(jīng)生物學實驗,需要迅速更換細胞浸溶液濃度以免受體敏感性降低(desensitization)或需要模擬快速突觸反應(yīng)的壽命。原則上細胞的浸溶液成分或玻璃管內(nèi)填充液成分應(yīng)該與細胞外或細胞內(nèi)間質(zhì)的成分相似,實際研究中,為了探討某些通道或電位特性,對這些實驗溶液的成分或濃度會作必要調(diào)整,沒有哪種溶液是理想的。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團隊,7*46...
ePatch的設(shè)計的一些亮點還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進行實驗記錄,你不用再專門拿一個實驗記錄本了,也不用再擔心本本上記錄的內(nèi)容找不到對應(yīng)的數(shù)據(jù)了,系統(tǒng)會把他們一一對應(yīng)起來。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,直接拖拽就可以,還伴隨著示例圖,讓你對你編輯的程序一目了然。實時的全細胞參數(shù)估算,包括封接電阻,膜電容,膜電阻等重要參數(shù)強大的在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/Vgraph,eventdetection,F(xiàn)FT,以及電流鉗模式下的APthresholddetection,APfrequency,APslope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,你要是個程序達人,可以支持使用Matlab進...
1937年,Hodgkin和Huxley在烏賊巨大神經(jīng)軸突細胞內(nèi)實現(xiàn)細胞內(nèi)電記錄,獲1963年Nobel獎1946年,凌寧和Gerard創(chuàng)造拉制出前列直徑小于1μm的玻璃微電極,并記錄了骨骼肌的電活動。玻璃微電極的應(yīng)用使的電生理研究進行了重命性的變化。Voltageclamp(電壓鉗技術(shù))由Cole和Marmont發(fā)明,并很快由Hodgkin和Huxley完善,真正開始了定量研究,建立了H一H模型(膜離子學說),是近代興奮學說的基石。1948年,Katz利用細胞內(nèi)微電極技術(shù)記錄到了終板電位;1969年,又證實N—M接觸后的Ach以"量子式"釋放,獲1976年Nobel獎。1976年,德國的Ne...
膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細胞內(nèi)插入兩個電極,對細胞損傷很大,在小細胞如元,就難以實現(xiàn),又因細胞形態(tài)復雜,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的...
對電極持續(xù)施加一個1mV、10~50ms的階躍脈沖刺激,電極入水后電阻約4~6MΩ,此時在計算機屏幕顯示框中可看到測試脈沖產(chǎn)生的電流波形。開始時增益不宜設(shè)得太高,一般可在1~5mV/pA,以免放大器飽和。由于細胞外液與電極內(nèi)液之間離子成分的差異造成了液結(jié)電位,故一般電極剛?cè)胨畷r測試波形基線并不在零線上,須首先將保持電壓設(shè)置為0mV,并調(diào)節(jié)“電極失調(diào)控制“使電極直流電流接近于零。用微操縱器使電極靠近細胞,當電極前列與細胞膜接觸時封接電阻指示Rm會有所上升,將電極稍向下壓,Rm指示會進一步上升。通過細塑料管向電極內(nèi)稍加負壓,細胞膜特性良好時,Rm一般會在1min內(nèi)快速上升,直至形成GΩ級的高阻抗封...
把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應(yīng)的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應(yīng)當在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料...
膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術(shù),它可以在單細胞或組織切片上記錄膜電位的變化。這種技術(shù)可以用來研究細胞膜中的離子通道、離子泵以及神經(jīng)元的電活動等。在膜片鉗實驗中,研究者會將單細胞或組織切片放置在一個稱為膜片電極的微小玻璃管中。這個電極會緊密地貼合在細胞或組織的表面,形成一個高阻抗的界面,使得研究者可以精確地測量細胞膜電位的變化。膜片鉗實驗的結(jié)果通常以電流-時間曲線(i-t曲線)的形式呈現(xiàn)。這些曲線可以顯示出在給定的時間內(nèi)通過特定通道的電流強度,從而幫助研究者了解通道的性質(zhì)和功能。除了測量電流外,膜片鉗還可以用來記錄膜電位的變化。這些變化可以反映出細胞對于各種刺激的反應(yīng),例如神經(jīng)元的興...
高阻密封技術(shù)還***降低了電流記錄的背景噪聲,從而大幅提高了時間、空間和電流分辨率,如10μs的時間分辨率、1平方微米的空間分辨率和10-12年的電流分辨率。影響電流記錄分辨率的背景噪聲不僅來自膜片鉗放大器本身,還來自信號源的熱噪聲。信號源就像一個簡單的電阻,其熱噪聲為σn=4Kt△f/R其中σn為電流均方差的平方根,k為玻爾茲曼常數(shù),t為溫度,△f為測量帶寬,R為電阻值??梢钥闯?,為了獲得低噪聲電流記錄,信號源的內(nèi)阻必須非常高。如果在1kHz帶寬、10%精度的條件下記錄1pA的電流,信號源的內(nèi)阻應(yīng)該大于2gω。電壓鉗技術(shù)只能測量內(nèi)阻為100kω~50mω的大電池的電流,常規(guī)技術(shù)和制備無法達到...
電壓鉗技術(shù),是20世紀初由Cole發(fā)明,Hodgkin和Huxley完善,其設(shè)計的主要目的是為了證明動作電位的產(chǎn)生機制,即動作電位的峰電位是由于膜對鈉的通透性發(fā)生了一過性的增大過程。但當時沒有直接測定膜通透性的方法,于是就用膜對某種離子的電導來**該種離子的通透性,膜電導測定的依據(jù)是電學中的歐姆定律,如膜的Na電導GNa與電化學驅(qū)動力(Em-ENa)和膜電流INa的關(guān)系GNa=INa/(Em-ENa).因此可通過測量膜電流,再利用歐姆定律來計算膜電導,但是,利用膜電流來計算膜電導時,記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變,否則膜電流的變化就不能**膜電導的變化。這一條件是利用電壓鉗技術(shù)實現(xiàn)的。下張...
膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細胞內(nèi)插入兩個電極,對細胞損傷很大,在小細胞如元,就難以實現(xiàn),又因細胞形態(tài)復雜,很難保持細胞膜各處生物特性的一致。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的...
膜片鉗技術(shù)與其他技術(shù)的結(jié)合Neher等**將膜片鉗技術(shù)與Fura2熒光鈣測量技術(shù)相結(jié)合,同時進行細胞內(nèi)熒光強度、細胞膜離子通道電流、細胞膜電容等多項指標變化的快速交替測量,從而獲得同一事件過程中各因素的各自變化,進而分析這些變化之間的關(guān)系。Neher將能夠光解鈣離子的鈣螯合物引入膜片鉗技術(shù),進而可以定量研究鈣離子濃度與分泌速率的關(guān)系以及相對較大的分泌速率。他還發(fā)明了膜片鉗的膜電容檢測與碳纖維電極的電化學檢測相結(jié)合的技術(shù)。然后***將光電聯(lián)合檢測技術(shù)和碳纖維電極電化學檢測技術(shù)相結(jié)合。這種結(jié)合既能研究分泌機制,又能鑒定分泌物質(zhì),彌補了各單一方法的不足。Eberwine于1991年***將膜片鉗技術(shù)...
把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻)。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs,用于消除全細胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應(yīng)的變化,逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應(yīng)當在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安...
1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù)。1980年Sigworth等在記錄電極內(nèi)施加5-50cmH2O的負壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-seal),明顯降低了記錄時的噪聲實現(xiàn)了單根電極既鉗制膜片電位又記錄單通道電流的突破。1981年Hamill和Neher等對該技術(shù)進行了改進,引進了膜片游離技術(shù)和全細胞記錄技術(shù),從而使該技術(shù)更趨完善,具有1pA的電流靈敏度、1μm的空間分辨率和10μs的時間分辨率。1983年10月,《Single-ChannelRecord...
離子通道結(jié)構(gòu)研究∶目前,絕大多數(shù)離子通道的一級結(jié)構(gòu)得到了闡明但根本的還是要搞清楚各種離子通道的三維結(jié)構(gòu),在這方面,美國的二位科學家彼得阿格雷和羅德里克麥金農(nóng)做出了一些開創(chuàng)性的工作,他們到用X光繞射方法得到了K離子通道的三維結(jié)構(gòu),二位因此獲得2003年諾貝系化學獎。有關(guān)離子通道結(jié)構(gòu)不是本PPT的重點,可參考楊寶峰的和Hill的
膜片鉗在通道研究中起著重要的作用。膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和區(qū)分單個離子通道電流及其開閉時間,區(qū)分離子通道的離子選擇性,同時發(fā)現(xiàn)新的離子通道和亞型,在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎(chǔ)上,進一步計算細胞膜上的通道數(shù)和開放概率。也可用于研究某些細胞內(nèi)或細胞外物質(zhì)對離子通道的開閉和通道電流的影響。同時用于研究細胞信號的跨膜轉(zhuǎn)導和細胞分泌機制。結(jié)合分子克隆和定點突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于研究離子通道的分子結(jié)構(gòu)與生物學功能的關(guān)系。膜片鉗技術(shù)也可用于分析藥物對其靶受體的作用位點。例如,神經(jīng)元煙堿受體是配體門控離子通道,膜片鉗全細胞記錄技術(shù)可以通過記錄煙堿誘發(fā)電流,直接反映神經(jīng)元煙堿受體活動的全過程,包括受體...
80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認識也不斷的更新,同時還形成了許多病因?qū)W與藥理學方面的新觀點。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得...
膜片鉗技術(shù)的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極,并將它固定在電極夾持器中。2.通過一個與電極夾持器連接的導管給微電極內(nèi)一個壓力,一直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸沒在溶液中時給電極一個測定脈沖(命令電壓,如5-10ms,10mV)讀出電流,按照歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位(junctionpotentials)調(diào)至零位,這種電位差是由于電極內(nèi)填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細胞表面,并觀察電流的變化,直至阻抗達到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調(diào)整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平,使放...
一、記錄設(shè)備首先,盡可能完善膜片鉗記錄設(shè)備是實驗前的重要步驟,如用模型細胞測定電子設(shè)備、安裝并測試應(yīng)用軟件、調(diào)節(jié)光學顯微鏡、檢驗防震工作臺等。二、微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細玻璃管拉制成的。標準的毛細玻璃管(外經(jīng)1.5mm,管壁厚0.3mm)適合于制作單通道記錄的微電極,而全細胞記錄則應(yīng)選管壁較薄(0.16mm)的毛細玻璃管,這樣可以使電極阻抗較低。三、封接(Sealing)技術(shù)封接(seal)是膜片鉗記錄的關(guān)鍵步驟之一。封接不好噪聲太大必然影響細胞膜電信號的記錄,一般要求封接阻抗至少20GΩ才可進行常規(guī)記錄。為了形成良好封接必須保持清潔的溶液、良好的視野以及適當?shù)碾姌O鍍膜...
實驗溶液浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內(nèi)的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內(nèi)容,這關(guān)系到封接的容易程度、細胞存活狀態(tài)及膜電位的狀態(tài)等。在實驗記錄過程中,尤其是神經(jīng)生物學實驗,需要迅速更換細胞浸溶液濃度以免受體敏感性降低(desensitization)或需要模擬快速突觸反應(yīng)的壽命。原則上細胞的浸溶液成分或玻璃管內(nèi)填充液成分應(yīng)該與細胞外或細胞內(nèi)間質(zhì)的成分相似,實際研究中,為了探討某些通道或電位特性,對這些實驗溶液的成分或濃度會作必要調(diào)整,沒有哪種溶液是理想的。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團隊,7*46...
電壓鉗的缺點∶電壓鉗技術(shù)目前主要用于巨火細胞的全細胞電流研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮其它技術(shù)不能替代的作用。但也有其致命的弱點1、微電極需刺破細胞膜進入細胞,以致造成細胞漿流失,破壞了細胞生理功能的完整性;2、不能測定單一通道電流。因為電壓鉗制的膜面積很大,包含著大量隨機開放和關(guān)閉著的通道,而且背景噪音大,往往掩蓋了單一通道的電流。3、對體積小的細胞(如哺乳類***元,直徑在10-30μm之間)進行電壓鉗實驗,技術(shù)上有更大的困難。由于電極需插入細胞,不得不將微電極的前列做得很細,如此細的前列致使電極阻抗很大,常常是60~-8OMΩ或120~150MΩ(取決于不同的充灌液)...
80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認識也不斷的更新,同時還形成了許多病因?qū)W與藥理學方面的新觀點。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得...
離子通道是一種特殊的膜蛋白,它橫跨整個膜結(jié)構(gòu),是細胞內(nèi)部與部外聯(lián)系的橋梁和細胞內(nèi)外物質(zhì)交換的孔道,當通道開放時。細胞內(nèi)外的一些無機離子如Na,kCa等帶電離子可經(jīng)通道順濃度梯度或電位梯度進行跨膜擴散,從而形成這些帶電離子在膜內(nèi)外的不同分布態(tài)勢,這種態(tài)勢和在不同狀態(tài)下的動態(tài)變化是可興奮細胞靜息電位和動作電的基礎(chǔ)。這些無機離子通過離子通道的進圍所產(chǎn)生的電活動是生命活動的基礎(chǔ),只有在此基礎(chǔ)上才可能有腺體分泌、肌肉收縮、基因表達、新陳代謝等生命活動。離子通道結(jié)構(gòu)和功能障礙決定了許多疾病的發(fā)生和發(fā)展。因此,了解離子通道的結(jié)構(gòu)、功能以及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系對于從分子水平深入探討某些疾病的病理生理機制、發(fā)現(xiàn)特異...
80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認識也不斷的更新,同時還形成了許多病因?qū)W與藥理學方面的新觀點。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得...
膜片鉗技術(shù)是神經(jīng)科學領(lǐng)域非常重要的一項技術(shù),1976年由國馬普生物物理研究所Neher和Sakmann發(fā)明,從而在活細胞上記錄到單個離子通道的電流。近半個世紀來,膜片鉗技術(shù)已經(jīng)成為神經(jīng)科學領(lǐng)域較常用也是較實用的技術(shù)之一,具有極大的精確性和靈活性,能夠揭示離子通道,單細胞突觸反應(yīng),及神經(jīng)環(huán)路連接等多層次的電生理特性。做過膜片鉗的人都知道,膜片鉗的信號采集設(shè)備一般由前置放大器,放大器,模數(shù)/數(shù)模轉(zhuǎn)換器等構(gòu)成,神經(jīng)元電信號先通過前置放大器(headstage)初步放大,后傳輸入放大器進一步放大,再傳入模數(shù)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號,后被計算機采集。下圖顯示的是我們較常使用的AXON和HEKA膜片鉗的一個信...
ePatch的一些設(shè)計亮點還包括:可以在軟件中用數(shù)據(jù)記錄實驗,不用帶專門的實驗筆記本,也不用擔心這個筆記本上記錄的內(nèi)容找不到對應(yīng)的數(shù)據(jù),系統(tǒng)會一一對應(yīng)。電壓電流刺激模式的編輯就更蠢了。很多模塊可以直接拖拽,并配有樣圖,讓你對自己編輯的程序一目了然。實時全電池參數(shù)估計,包括強大的密封電阻、膜電容、膜電阻等重要參數(shù)在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/Vgraph、eventdetection、FFT,電流鉗模式下的APthresholddetection、APfrequency、APslope等數(shù)據(jù)可以多種格式保存。如果你是程序員,可以支持使用Matlab進行數(shù)據(jù)分析。如果沒有這樣的經(jīng)歷,就沒有問...
電壓鉗的缺點:目前電壓鉗技術(shù)主要用于研究巨火細胞的全細胞電流,特別是在分子克隆卵母細胞表達電流的鑒定中,發(fā)揮著不可替代的作用。然而,它也有其致命的弱點:1。微電極需要刺穿細胞膜進入細胞,導致細胞質(zhì)丟失,破壞細胞生理功能的完整性;2、不能確定單通道電流。由于電壓鉗位薄膜面積大,包含大量隨機開關(guān)的通道,背景噪聲大,往往會掩蓋單通道的電流。3.在小細胞(如直徑10-30μm的哺乳動物細胞)上進行電壓鉗實驗,技術(shù)難度更大。因為電極需要插入到細胞中,所以微電極的前端必須做得非常薄。如此薄的前端導致電極阻抗較大,往往為60~-80mω或120~150MΩ(視灌注液不同而定)。如此大的電極阻抗,不利于用細胞...
膜片鉗技術(shù)發(fā)展至今,已經(jīng)成為現(xiàn)代細胞電生理的常規(guī)方法,它不僅可以作為基礎(chǔ)生物醫(yī)學研究的工具,而且直接或間接為臨床醫(yī)學研究服務(wù)。目前膜片鉗技術(shù)廣泛應(yīng)用于神經(jīng)(腦)科學、心血管科學、藥理學、細胞生物學、病理生理學、中醫(yī)藥學、植物細胞生理學、運動生理等多學科領(lǐng)域研究。隨著全自動膜片鉗技術(shù)(Automaticpatchclamptechnology)的出現(xiàn),膜片鉗技術(shù)因其具有的自動化、高通量特性,在藥物研發(fā)、藥物篩選中顯示了強勁的生命力。離子和離子通道是細胞興奮的基礎(chǔ),亦即產(chǎn)生生物電信號的基礎(chǔ),生物電信號通常用電學或電子學方法進行測量。美國可升級膜片鉗報價膜片鉗技術(shù):從一小片膜(約幾平方微米)上獲取電...
膜片鉗技術(shù)是一種細胞內(nèi)記錄技術(shù),是研究離子通道活動的蕞佳工具,也是應(yīng)用蕞很廣的電生理技術(shù)之一。該技術(shù)通過施加負壓將微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)的前列與細胞膜緊密接觸,形成GΩ以上的阻抗,使電極開口處的細胞膜與其周圍膜在電學上絕緣。被孤立的小膜片面積為μm量級,內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。玻璃微電極中含有一根浸入電解溶液中的導線,用于傳導離子。在此基礎(chǔ)上對該膜片施行電壓鉗位(即保持跨膜電壓恒定),如果單個離子通道被包含在膜片內(nèi),則可對此膜片上的離子通道的電流進行監(jiān)測記錄。通過觀測單個通道開放和關(guān)閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜...
膜片鉗技術(shù)是一種用于研究生物細胞膜離子通道的實驗方法。它通過在細胞膜上形成小孔,從而對細胞膜的離子通道進行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實驗中,研究人員通常會先將細胞膜上的脂質(zhì)雙層通過特殊設(shè)備進行穿刺,形成一個小孔。然后,他們將一個玻璃微電極插入這個小孔中,以接觸并測量細胞膜內(nèi)部的電位變化。這個玻璃微電極的端非常細,不會對細胞膜產(chǎn)生太大的干擾。通過膜片鉗技術(shù),科學家可以精確地測量離子通道的活動,從而了解離子通道在細胞生理學中的作用。例如,他們可以測量離子通道在不同刺激下如何開啟或關(guān)閉,以及這些變化如何影響細胞的電活動和化學信號傳遞。此外,膜片鉗技術(shù)還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點。通過觀察藥...