杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-17

       

       數(shù)字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來(lái)說(shuō),數(shù)字PCR對(duì)結(jié)果的判定不依賴(lài)于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值,不受擴(kuò)增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。

       數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬(wàn)份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個(gè)單元都會(huì)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,然后再對(duì)每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號(hào)的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對(duì)而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。


線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí),靈敏度高達(dá)萬(wàn)分之一。杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介

杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介,數(shù)字PCR

       CNV(Copy Number Variations,拷貝數(shù)變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異,測(cè)序方法適用于高于30%的變異率檢測(cè),而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數(shù)字PCR通過(guò)直接計(jì)數(shù)目標(biāo)基因與參照基因( 拷貝數(shù)為1的基因,例如RNaseP) 的數(shù)目,計(jì)算比值,直接得到目標(biāo)基因的拷貝數(shù)可以達(dá)到極高的拷貝數(shù)分辨精度。


       除此之外,dPCR在病原微生物檢測(cè)、microRNA研究、基因表達(dá)研究、NGS測(cè)序文庫(kù)的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測(cè)、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待,而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標(biāo)準(zhǔn)品精確定量、環(huán)境樣本檢測(cè)等具體的應(yīng)用方向上,已經(jīng)有大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。


杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介FAM、VIC雙通道熒光檢測(cè)。

杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介,數(shù)字PCR

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢查

       鐮狀細(xì)胞貧血(sickle cell anemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細(xì)有效的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測(cè)孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時(shí),可以**的檢測(cè)出HBB基因突變[3],可以說(shuō)是相當(dāng)厲害了。


       數(shù)字PCR是一種核酸分子***值定量技術(shù),能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的***值定量。該試劑盒采用創(chuàng)新的一步法逆轉(zhuǎn)錄數(shù)字PCR技術(shù),將*****的RNA逆轉(zhuǎn)錄及數(shù)字PCR擴(kuò)增整合到一個(gè)反應(yīng)體系,單管雙檢同時(shí)測(cè)定*****的兩個(gè)**基因,消除***變異帶來(lái)的漏檢風(fēng)險(xiǎn)。

       MicroDrop-100全新微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)為永諾生物旗下子公司永諾醫(yī)療自主研發(fā)的檢測(cè)設(shè)備,此系統(tǒng)檢測(cè)無(wú)需依賴(lài)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),可達(dá)到***定量,具有超高靈敏度,檢測(cè)靈敏度高達(dá)1個(gè)拷貝,且具有較好的重復(fù)性,降低同樣本不同批次的檢測(cè)差異。數(shù)字PCR結(jié)果采取終點(diǎn)判讀法,相比熒光定量PCR的過(guò)程性讀取可有效降低對(duì)PCR 擴(kuò)增效率的依賴(lài)、降低PCR***物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,對(duì)于復(fù)雜樣本也能提供穩(wěn)定的檢測(cè)結(jié)果等特點(diǎn),在******臨床實(shí)驗(yàn)及***患者的治療過(guò)程中可發(fā)揮重要作用。 高靈敏度——數(shù)字PCR的靈敏度與同體積反應(yīng)體系的分割份數(shù)成正比。

杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介,數(shù)字PCR

定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn):


1. 在20多年的使用和發(fā)展中,定量PCR作為一種技術(shù)平臺(tái),已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù),在工業(yè)界和分子檢測(cè)的某些應(yīng)用上,定量PCR已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”?;A(chǔ)研究方面,則形成了被稱(chēng)為MIQE的“定量PCR標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)指南”。   

2. 在定量PCR的各種應(yīng)用中,基因表達(dá)分析(gene expression analysis)的應(yīng)用比重約占七成,綜合各種因素來(lái)看,眼下定量PCR還是進(jìn)行基因表達(dá)研究的理想手段。   

3. 上述的“各種因素”具體展開(kāi),主要包括:通量、自動(dòng)化程度、各種檢測(cè)探針與染料、檢測(cè)通道、成本和可參考文獻(xiàn)與protocol的數(shù)目等等。   

4. 就目前市場(chǎng)上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來(lái)看,定量PCR在檢測(cè)的線性范圍上具有優(yōu)勢(shì),意味著同一個(gè)run內(nèi)可對(duì)各種表達(dá)豐度的樣品進(jìn)行分析。



2個(gè)光電倍增管(PMT),靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD。深圳廣州永諾數(shù)字PCR原理

液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)。杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介

產(chǎn)品特點(diǎn)

       無(wú)需依賴(lài)傳統(tǒng)熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可實(shí)現(xiàn)核酸的***定量。

       全封閉防污染設(shè)計(jì),一鍵式自動(dòng)化操作。

       采用主流可靠的解決方案,系統(tǒng)由微滴生成儀、微滴檢測(cè)儀、數(shù)據(jù)分析軟件組成,并可選配同品牌封膜儀、PCR儀等

       微滴生成采用油包水乳化微滴技術(shù),在微管道中利用氣壓驅(qū)動(dòng),2mins生成高達(dá)10萬(wàn)個(gè)皮升級(jí)的微滴,高效高產(chǎn),支持多重?cái)?shù)字PCR的開(kāi)發(fā)。

       微滴生成芯片為高精度微流控芯片設(shè)計(jì),三維微納防污染結(jié)構(gòu),一張芯片可同時(shí)處理8個(gè)樣本。

       微滴檢測(cè)使用雙通道熒光,支持EvaGreen染料法及探針?lè)ā?/span>

       檢測(cè)線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí),基因突變檢測(cè)靈敏度高達(dá)0.01%。

       檢測(cè)通量高,可一次檢測(cè)高達(dá)96個(gè)樣本,支持靈活設(shè)定。

       全中文分析軟件,人性化界面設(shè)置,多種分析工具供用戶選擇。

       本系統(tǒng)為開(kāi)放式平臺(tái),可使用第三方PCR反應(yīng)液,支持用戶自行開(kāi)發(fā)試劑、產(chǎn)品。



杭州微滴式數(shù)字PCR簡(jiǎn)介

浚和(上海)儀器有限公司是一家供應(yīng)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)儀器和設(shè)備的專(zhuān)業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商,致力于為客戶提供專(zhuān)業(yè)的定制化解決方案。多年來(lái),持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測(cè)院等多個(gè)行業(yè)提供先進(jìn)的產(chǎn)品和專(zhuān)業(yè)的服務(wù)。

浚和在不斷引進(jìn)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)儀器設(shè)備的同時(shí),結(jié)合行業(yè)和市場(chǎng)需求,加強(qiáng)和客戶之間的溝通,并與國(guó)際上多家**儀器設(shè)備制造商保持著長(zhǎng)期穩(wěn)定的合作關(guān)系,不定期地與合作商進(jìn)行技術(shù)交流,努力加強(qiáng)自身技術(shù)力量。公司配備了數(shù)名有著多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員,依靠雄厚的技術(shù)實(shí)力、科學(xué)合理的配置方案、專(zhuān)業(yè)的安裝調(diào)試和周到的售后服務(wù),得到了廣大用戶的支持與信賴(lài)。

公司主要經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品包括:等離子清洗機(jī)、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機(jī)、水分測(cè)定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時(shí),公司還提供專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù),如設(shè)備的維護(hù)、驗(yàn)證等。

浚和儀器將始終以行業(yè)特點(diǎn)為立足點(diǎn),以客戶需求為導(dǎo)向,不斷地提高自身專(zhuān)業(yè)技術(shù)能力,不停地完善客戶服務(wù)質(zhì)量,在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神,力求與客戶共同進(jìn)步,為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。

與數(shù)字PCR相關(guān)的擴(kuò)展資料:

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數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子***定量技術(shù)。相較于 qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出 DNA分子的個(gè)數(shù),是對(duì)起始樣品的***定量。