數(shù)字PCR

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-07-16

與常規(guī)PCR方法相比,數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢:1、能夠***定量:常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線,但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系,條件上會存在差異,另外加上PCR擴(kuò)增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動力學(xué)影響,可進(jìn)行***定量。2、樣本需求量低:適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本。3、靈敏度高:數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個(gè) PCR反應(yīng),這些反應(yīng)可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。4、高耐受性:由于目的序列被分配到多個(gè) 反應(yīng)體系中,***降低了背景信號和***物對反應(yīng)的干擾,擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小??:?上海)儀器科技有限公司力于提供數(shù)字PCR ,歡迎您的來電!數(shù)字PCR

數(shù)字PCR

數(shù)字PCR是一種核酸分子 定量技術(shù)。當(dāng)前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應(yīng)的循環(huán)數(shù);數(shù)字PCR是***的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量,是一種 定量的方法。主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。深圳國產(chǎn)數(shù)字PCR哪家好浚和(上海)儀器科技有限公司是一家專業(yè)提供數(shù)字PCR 的公司,歡迎您的來電!

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數(shù)字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值,不受擴(kuò)增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個(gè)單元都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,然后再對每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。 

定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn):5.目前定量PCR已經(jīng)能實(shí)現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。6.數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標(biāo)準(zhǔn)曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。7.基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實(shí)現(xiàn)微小差異的基因表達(dá)分析,如等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、microRNA表達(dá)分析等等。所謂“微小差異”的標(biāo)準(zhǔn)一般而言是指表達(dá)水平的差異在2倍以內(nèi)。8.同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù)。數(shù)字PCR ,就選浚和(上海)儀器科技有限公司,讓您滿意,有想法可以來我司咨詢!

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數(shù)字PCR(DigitalPCR-dPCR)技術(shù)是一種新的核酸檢測和定量方法,與傳統(tǒng)定量PCR(qPCR)技術(shù)不同,數(shù)字PCR采用***定量的方式,不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本,直接檢測目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性,dPCR迅速得到***的應(yīng)用,這項(xiàng)技術(shù)在極微量核酸樣本檢測、復(fù)雜背景下稀有突變檢測和表達(dá)量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認(rèn)可,而其在基因表達(dá)研究、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、**標(biāo)志物稀有突變檢測、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定、NGS測序文庫精確定量和結(jié)果驗(yàn)證等諸多方面具有的廣闊應(yīng)用前景已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注??:?上海)儀器科技有限公司力于提供數(shù)字PCR ,有想法的不要錯(cuò)過哦!南通MicroDrop-100數(shù)字PCR現(xiàn)貨

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相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:●靈敏度可達(dá)到單個(gè)核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮;●無需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進(jìn)行***定量,直 接獨(dú)處DNA分子的個(gè)數(shù);●適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測:終點(diǎn)PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴(kuò)增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問題,適合各類復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行***定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等;數(shù)字PCR