南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

精細診斷是精細醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，液體活檢作為一種無創(chuàng)、均一的檢測技術(shù)，迅速成為精細診斷領(lǐng)域的新星，2015年被《麻省理工大學(xué)科技評論》評選為年度 突破技術(shù)，2017年入選世界經(jīng)濟論壇評出的全球 新興技術(shù)，引發(fā)了全球科研、臨床和產(chǎn)業(yè)界的極大熱情，已在**、產(chǎn)前診斷、***移植等疾病領(lǐng)域***被應(yīng)用。數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測序技術(shù)，共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器；數(shù)字PCR技術(shù)是公認(rèn)的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較高的檢測方法，采用有限稀釋的方法將目標(biāo)分子分割到 的反應(yīng)體系中，在不依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線條件下實現(xiàn)靶標(biāo)***定量檢測，能檢測低至0.01%的突變基因；Bio-Rad及ThermoFisher目前是這一領(lǐng)域的主導(dǎo)者，分別采用微滴或芯片方式將樣本分割成兩萬份，MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份，打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。檢測數(shù)量一次可達96個樣品。南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

數(shù)字PCR檢測及分析原理在上世紀(jì)90年代就被提出來了，但是無奈受限于當(dāng)時的技術(shù)條件，樣本稀釋及分配都是靠手工來完成的，受到很多因素的干擾和限制；并且結(jié)果分析對于研究者來說也十分枯燥與繁瑣，因此在很長一段時間dPCR發(fā)展停滯不前。后來由于微流控技術(shù)與微納集成制造工藝的發(fā)展解決了dPCR過程中的幾個關(guān)鍵技術(shù)問題，推動了dPCR的研究與商業(yè)化的發(fā)展。目前根據(jù)dPCR樣本稀釋分配的方式，基本可分為三大類，一種是基于大規(guī)模集成微流控芯片；第二種是使用微反應(yīng)室/孔板；第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式，其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或者微滴當(dāng)中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于1或者等于1。經(jīng)過PCR擴增之后，有一個核酸分子的模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。無錫永諾數(shù)字PCR銷售電話FAM、VIC雙通道熒光檢測。

MicroDrop-100數(shù)字PCR系統(tǒng)具有如下優(yōu)點：1、JUE對定量，結(jié)果判讀不需要依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線；2、突破局限，檢測靈敏度可低至萬分之一；3、專利設(shè)計的具有高精度復(fù)雜三維微納防污染結(jié)構(gòu)的微流控芯片，單張可同時處理1-8個樣本；4、一鍵式自動操作，20uLPCR體系可生成100,000微滴，8個樣本單次微滴生成 需2分鐘；5、FAM、HEX（VIC）雙熒光通道，半導(dǎo)體激光器做為激發(fā)光源相比LED光源，穩(wěn)定性高，功率穩(wěn)定不影響檢測靈敏度，單色性能優(yōu)異降低對檢測特異性的影響，且方向性好；6、檢測器為2個光電倍增管，靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD,普通的硅光子計數(shù)器，增益為10^5，光電倍增管增益可以達 到10^9；7、 知識產(chǎn)權(quán)的軟件系統(tǒng)可直接計算拷貝數(shù)、拷貝數(shù)濃度，CNV值，突變豐度；閾值線可自動或手動完成，每個樣本可單獨設(shè)定閾值線；輸出數(shù)據(jù)圖標(biāo)、直方圖、一維圖、二維圖、濃度圖、95%置信度不確定性區(qū)間等；軟件可自動識別復(fù)雜微滴分簇四簇；軟件具備數(shù)據(jù)質(zhì)控功能，支持陽性微滴數(shù)、陰性微滴數(shù)、總微滴數(shù)統(tǒng)計及這些指標(biāo)的任意組合；單個樣本100,000微滴的反應(yīng)體系以及高靈敏度的檢測系統(tǒng)，配以獨特的軟件系統(tǒng)，可以實現(xiàn)高達20重的PCR分析；8、單次檢測通量96個樣本，操作靈活；

二代測序輔助建庫目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法，在均相溶液中，當(dāng)擴增引物增加時，由于擴增引物之間的相互作用，從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增，將可降低引物間相互作用，提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增，得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認(rèn)。液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)。

數(shù)字PCR的應(yīng)用檢驗檢疫食品安全?轉(zhuǎn)基因食品檢測（國標(biāo)）?病原菌鑒定?動物源性檢測分析科研?基因表達差異監(jiān)測?CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證?甲基化含量鑒定?單細胞研究：測序、PCR臨床?**液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)?無創(chuàng)產(chǎn)前篩查：低成本、快速?***性疾?。篐BV、HIV定量據(jù)悉，MiniDrop?**團隊由微流控、光學(xué)、機電學(xué)、化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科交叉領(lǐng)域的**組成，依托精密儀器研發(fā)、生物納米材料與分子生物學(xué)等平臺，以微滴式數(shù)字PCR儀為**，打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品，致力于解決**、***領(lǐng)域的精細診斷。適用復(fù)雜樣品的檢測。南京微滴式數(shù)字PCR品牌

準(zhǔn)確度不完全依賴于擴增效率。南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

與常規(guī)PCR方法相比，數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢：1、能夠完全定量：常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線，但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系，條件上會存在差異，另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴增動力學(xué)影響，可進行完全定量。2、樣本需求量低：適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本3、靈敏度高：數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個 PCR反應(yīng)，這些反應(yīng)可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。4、高耐受性：由于目的序列被分配到多個 反應(yīng)體系中，明顯降低了背景信號和yìzhì物對反應(yīng)的干擾，擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。南京微流控芯片數(shù)字PCR如何選型

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