南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案

       要了解為什么傳統(tǒng) PCR 存在限制，務(wù)必要了解 PCR 反應(yīng)過程中發(fā)生了什么?；?PCR 運行可以分為三個階段：

指數(shù)期

       每個循環(huán)積聚的產(chǎn)物準確加倍（假定 ** 反應(yīng)效率）。該反應(yīng)具有高度特異性和精確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴增，因為所有試劑均新鮮可用，反應(yīng)的動力學(xué)推動反應(yīng)有利于擴增子加倍。

線性期（高變異性）

       隨著反應(yīng)繼續(xù)，一些試劑因擴增而被消耗。反應(yīng)開始減緩，并且每個循環(huán)的 PCR 產(chǎn)物不再加倍。

平臺期（終點：使用傳統(tǒng)方法進行凝膠檢測）

       反應(yīng)停止，不再產(chǎn)生更多產(chǎn)物，并且如果放置時間夠長，PCR 產(chǎn)物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應(yīng)動力學(xué)，所以每支試管或每個反應(yīng)將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內(nèi)，傳統(tǒng) PCR 進行測量，又稱為終點檢測。 樣本多樣性，樣本通量可達96個樣本，支持靈活設(shè)定。南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案

**個體化診療

通過檢測T790M位點突變情況，可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限，沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測精度，此外，dPCR***定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了，可以監(jiān)控突變含量變化，做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。

2.）基因表達分析

伊馬替尼（Imatinib）可以有效幫助很多慢性髓細胞白血?。–ML）患者延長生存期，但是臨床上發(fā)現(xiàn)，伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行測定，結(jié)果檢測下限可以達到0.001%，顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢 深圳廣州永諾數(shù)字PCR簡介雙通道熒光檢測，支持EvaGreen染料及探針法。

MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點：

一、適應(yīng)性廣，靈活性高

1、理論上可覆蓋qPCR（熒光定量PCR)的所有應(yīng)用

2、樣本多樣性，樣本通量可達96個樣本，支持靈活設(shè)定

3、開放式平臺，支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。

二、靈敏度高，準確性高

1、***定量——無需依賴標準曲線

2、采用微滴式技術(shù)高達100,000個的微滴

3、線性范圍達到6個數(shù)量級，靈敏度高達萬分之一

三、可分析復(fù)雜混合物

1、準確度不完全依賴于擴增效率

2、雙通道熒光檢測，支持EvaGreen染料及探針法

3、支持多重數(shù)字PCR

四、操作簡單，使用方便

1、全封閉防污染設(shè)計，一鍵式自動化操作。

2、可選全中文分析軟件

       數(shù)字PCR檢測及分析原理在上世紀90年代就被提出來了，但是無奈受限于當時的技術(shù)條件，樣本稀釋及分配都是靠手工來完成的，受到很多因素的干擾和限制；并且結(jié)果分析對于研究者來說也十分枯燥與繁瑣，因此在很長一段時間dPCR發(fā)展停滯不前。后來由于微流控技術(shù)與微納集成制造工藝的發(fā)展解決了dPCR過程中的幾個關(guān)鍵技術(shù)問題，推動了dPCR的研究與商業(yè)化的發(fā)展。

       目前根據(jù)dPCR樣本稀釋分配的方式，基本可分為三大類，一種是基于大規(guī)模集成微流控芯片；第二種是使用微反應(yīng)室/孔板；第三種是微滴式。但不論是走芯片式還是微滴式，其基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或者微滴當中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于1或者等于1。經(jīng)過PCR擴增之后，有一個核酸分子的模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，可以推算出原始溶液的核酸濃度。 準確度不完全依賴于擴增效率。

MicroDrop-100數(shù)字PCR系統(tǒng)具有如下優(yōu)點：

1、JUE對定量，結(jié)果判讀不需要依賴標準曲線；

2、突破局限，檢測靈敏度可低至萬分之一；

3、專利設(shè)計的具有高精度復(fù)雜三維微納防污染結(jié)構(gòu)的微流控芯片，單張可同時處理1-8個樣本；

4、一鍵式自動操作，20uL PCR體系可生成100,000微滴，8個樣本單次微滴生成*需2分鐘；

5、FAM、HEX（VIC）雙熒光通道，半導(dǎo)體激光器做為激發(fā)光源相比LED光源，穩(wěn)定性高，功率穩(wěn)定不影響檢測靈敏度，單色性能優(yōu)異降低對檢測特異性的影響，且方向性好；

6、檢測器為2個光電倍增管，靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD,普通的硅光子計數(shù)器，增益為10^5，光電倍增管增益可以達到10^9；

7、**知識產(chǎn)權(quán)的軟件系統(tǒng)可直接計算拷貝數(shù)、拷貝數(shù)濃度，CNV 值，突變豐度；閾值線可自動或手動完成，每個樣本可單獨設(shè)定閾值線；輸出數(shù)據(jù)圖標、直方圖、一維圖、二維圖、濃度圖、95%置信度不確定性區(qū)間等；軟件可自動識別復(fù)雜微滴分簇四簇；軟件具備數(shù)據(jù)質(zhì)控功能，支持陽性微滴數(shù)、陰性微滴數(shù)、總微滴數(shù)統(tǒng)計及這些指標的任意組合；單個樣本100,000微滴的反應(yīng)體系以及高靈敏度的檢測系統(tǒng)，配以獨特的軟件系統(tǒng)，可以實現(xiàn)高達20重的PCR分析；

8、單次檢測通量96個樣本，操作靈活； FAM、VIC雙通道熒光檢測。無錫微滴式數(shù)字PCR現(xiàn)貨

單細胞研究：測序、PCR。南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案

       CNV（Copy Number Variations，拷貝數(shù)變異）研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異，測序方法適用于高于30%的變異率檢測，而qPCR的比較**辨在1.5倍左右，數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標基因與參照基因( 拷貝數(shù)為1的基因，例如RNaseP) 的數(shù)目，計算比值，直接得到目標基因的拷貝數(shù)可以達到極高的拷貝數(shù)分辨精度。

       除此之外，dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待，而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標準品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上，已經(jīng)有大量實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。

南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案

浚和（上海）儀器有限公司是一家供應(yīng)國內(nèi)外先進儀器和設(shè)備的專業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商，致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來，持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進的產(chǎn)品和專業(yè)的服務(wù)。

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公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括：等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等，目前主要合作品牌有：日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時，公司還提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，如設(shè)備的維護、驗證等。

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