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對(duì)講機(jī)常見故障問(wèn)題與解決方法
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免疫組化即用型二步法的具體實(shí)驗(yàn)流程步驟簡(jiǎn)介:1、脫蠟、水化組織切片;2、根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求,對(duì)組織切片進(jìn)行預(yù)處理;3、0.3%或3%H2O2去離子水孵育5分鐘-30分鐘,以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,PBS或TBS沖洗;4、滴加一抗,室溫或37℃孵育30~60分鐘,或4℃過(guò)夜,PBS或TBS浸洗3分鐘×5次;5、滴加enhangcer增強(qiáng)劑,37℃30min,PBS或TBS浸洗3分鐘×5次;6、滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體,室溫/37℃孵育30分鐘-1h,PBS/TBS沖洗,3分鐘×5次;7、應(yīng)用DAB溶液顯色;8、蒸餾水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。利用免疫組化鑒定特定的基因產(chǎn)物。清遠(yuǎn)多重免疫組化價(jià)格
邊緣效應(yīng)在免疫組化實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為組織或細(xì)胞邊緣與中心區(qū)域在染色和標(biāo)記上的差異,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。其主要原因是組織邊緣與玻片粘附不牢和試劑未充分覆蓋,為避免邊緣效應(yīng),可采取以下措施:1、使用APES或多聚賴氨酸處理玻片,增強(qiáng)組織與玻片的粘附性。2、切片應(yīng)盡量薄(不超過(guò)4微米),減少組織脫落。3、避免使用壞死較多的組織,減少損傷。4、滴加試劑時(shí)確保充分覆蓋組織,超出邊緣2mm,避免邊緣干燥。5、使用組化筆畫圈,將組織圈在中心,距邊緣3-4mm,避免油劑干擾。6、調(diào)整顯微鏡成像參數(shù),確保中心和邊緣信號(hào)平衡。使用數(shù)字成像系統(tǒng)時(shí),可進(jìn)行后處理,如修剪邊緣或調(diào)整亮度和對(duì)比度。湖州多重免疫組化免疫組化的操作步驟有哪些?
免疫組化的常見問(wèn)題分析:1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過(guò)深:抗?jié)舛冗^(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間;孵育溫度過(guò)高——選擇4℃或室溫孵育。2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色:石蠟切片脫蠟不徹底——延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間;蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時(shí)間;組織富含內(nèi)源性生物素與過(guò)氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉。3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無(wú)染色:抗?jié)舛冗^(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;組織中無(wú)目的抗原的表達(dá);抗種屬來(lái)源與二抗不匹配。
免疫組化是免疫組織化學(xué)染色的簡(jiǎn)稱,是病理里常用的染色手段。我們的皮膚組織標(biāo)本從身體上的病變部位取下來(lái)后會(huì)經(jīng)過(guò)脫水、包埋等程序制作成蠟塊。從這個(gè)蠟塊中切下很薄的切片,這些切片經(jīng)過(guò)染色后可以讓病理醫(yī)生在顯微鏡下觀察我們的病變組織中發(fā)生的情況。我們通常普通的病理檢查切片的染色方式是HE染色,但是我們有的時(shí)候看到病理報(bào)告上寫或者病理醫(yī)生說(shuō)需要做免疫組化染色,這是因?yàn)槠胀ǖ腍E染色只能讓醫(yī)生看到病變組織的結(jié)構(gòu)和組成,而免疫組化染色可以通過(guò)對(duì)多個(gè)不同分子的染色,讓醫(yī)生在顯微鏡下判斷出來(lái)這些細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì),就像給每個(gè)細(xì)胞貼上了名片一樣。免疫組化結(jié)合圖像分析軟件,量化數(shù)據(jù)處理,科學(xué)評(píng)估結(jié)果。
幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理:1、免疫熒光方法:利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。2、免疫酶標(biāo)方法:基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過(guò)光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前常用的技術(shù)。3、免疫膠體金技術(shù):免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒(méi)有明顯的影響。因此,用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位,甚至定量研究。免疫組化可助力制定更合理的治療方案。麗水病理切片免疫組化掃描
如何提高免疫組化染色結(jié)果的特異性?清遠(yuǎn)多重免疫組化價(jià)格
免疫組化技術(shù)中的信號(hào)放大方法主要包括以下幾種:1、TSA技術(shù)(酪胺信號(hào)放大技術(shù)): TSA技術(shù)基于酪胺的過(guò)氧化物酶反應(yīng),產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物,這些產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基結(jié)合,使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。該方法可以在一張組織切片上實(shí)現(xiàn)7-9種靶標(biāo)的標(biāo)記,有效提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。2、多聚酶法:通過(guò)多聚酶的作用,可以在抗體上形成大量的酶分子聚集體,從而增強(qiáng)信號(hào)的強(qiáng)度。這種方法在免疫組化檢測(cè)中廣泛應(yīng)用,能夠明顯提高檢測(cè)的靈敏度。3、銀增強(qiáng)法:利用銀離子在特定條件下被還原成金屬銀的特性,可以在抗體上形成一層銀沉積物,從而放大信號(hào)。這種方法在免疫電鏡中特別有用,能夠觀察到更加清晰的免疫復(fù)合物結(jié)構(gòu)。4、酶蛋白復(fù)合物法:通過(guò)將酶與抗體或其他蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物,可以在檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生更強(qiáng)的信號(hào)。這種方法結(jié)合了酶的催化活性和抗體的特異性,使得信號(hào)放大更加高效和準(zhǔn)確。清遠(yuǎn)多重免疫組化價(jià)格