江門多色免疫熒光掃描

多色免疫熒光的總體應(yīng)用思路：多標(biāo)技術(shù)：實(shí)現(xiàn)組織原位上多個(gè)靶標(biāo)的標(biāo)記，在染色 panel 中設(shè)置相應(yīng)目標(biāo)細(xì)胞的 marker；實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)細(xì)胞類群的識(shí)別和染色（各類淋巴細(xì)胞、髓系細(xì)胞、細(xì)胞因子等），對(duì)靶細(xì)胞的數(shù)量、空間分布、相互間位置關(guān)系等進(jìn)行定量；實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本Tumor微環(huán)境、Tumor異質(zhì)性、Tumor免疫浸潤(rùn)水平的描繪，結(jié)果可以應(yīng)用于不同Tumor亞型 / 不同醫(yī)療方案 / 不同實(shí)驗(yàn)因素干預(yù)的預(yù)后判斷 /醫(yī)療效果評(píng)價(jià) / 免疫應(yīng)答水平差異解析等場(chǎng)景，并可以聯(lián)合單細(xì)胞測(cè)序、空間轉(zhuǎn)錄組等組學(xué)實(shí)驗(yàn)，對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行組織原位上的驗(yàn)證和展示。通過(guò)時(shí)間分辨熒光成像，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)間相互作用及其時(shí)空變化。江門多色免疫熒光掃描

多色免疫熒光技術(shù)是一種先進(jìn)的熒光顯微技術(shù)，它基于免疫學(xué)原理，能夠同時(shí)檢測(cè)多種不同的蛋白質(zhì)或分子。該技術(shù)通過(guò)將不同顏色的熒光標(biāo)記與不同分子或蛋白質(zhì)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)在同一細(xì)胞或組織中多種成分的高效鑒定和定位。與傳統(tǒng)免疫熒光技術(shù)相比，多色免疫熒光技術(shù)的主要區(qū)別體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.檢測(cè)數(shù)量：傳統(tǒng)免疫熒光技術(shù)一般只能標(biāo)記3種蛋白，而多色免疫熒光技術(shù)則可以在同一張切片上同時(shí)標(biāo)記和檢測(cè)多達(dá)六七種甚至更多的蛋白質(zhì)或分子，從而有效提高檢測(cè)效率。2.抗體選擇：傳統(tǒng)免疫熒光技術(shù)要求一抗抗體種屬來(lái)源不能相同，而多色免疫熒光技術(shù)采用如TSA熒光標(biāo)記技術(shù)等，無(wú)需擔(dān)心抗體交叉反應(yīng)，一抗抗體選擇種屬來(lái)源不限，為實(shí)驗(yàn)提供了更大的靈活性。3.信號(hào)放大：與傳統(tǒng)免疫熒光相比，多色免疫熒光技術(shù)（如采用TSA技術(shù)）可將信號(hào)放大10-1000倍，使得檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確和敏感。4.穩(wěn)定性：普通熒光玻片大約可保存一周時(shí)間，而采用多色免疫熒光技術(shù)的熒光玻片可至少保存3-5個(gè)月，顯示出更強(qiáng)的穩(wěn)定性。中山TME多色免疫熒光mIHC試劑盒多色免疫熒光染色結(jié)合光譜成像，有效區(qū)分高密度標(biāo)記下的微弱信號(hào)，提升圖像解析度。

多色免疫熒光實(shí)驗(yàn)的操作流程主要包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：1.樣品準(zhǔn)備：從細(xì)胞培養(yǎng)物或動(dòng)物組織中獲取樣本，對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)物，可通過(guò)離心和PBS洗滌得到細(xì)胞沉淀；對(duì)于組織樣本，需進(jìn)行切片和固定。2.抗原修復(fù)：通過(guò)加熱和特定的修復(fù)液（如Tris-EDTA緩沖液）對(duì)組織切片進(jìn)行抗原修復(fù)，以增強(qiáng)抗體與抗原的結(jié)合。3.非特異性結(jié)合抑制：使用蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白（BSA）或胎牛血清（TBS）對(duì)樣本進(jìn)行封閉，減少非特異性結(jié)合。4.初次抗體孵育：將具有特異性的一抗體（可以是單克隆或多克隆抗體）加入樣本中，使其與抗原結(jié)合，并在適當(dāng)?shù)臏囟认路跤欢螘r(shí)間。5.洗滌：使用PBS或TBS緩沖液洗滌樣本，去除未結(jié)合的一抗體，通常需洗滌3-5次。6.第二次抗體孵育：加入與一抗體來(lái)源不同物種的熒光標(biāo)記的第二抗體，與一抗體結(jié)合，并在適當(dāng)溫度下再次孵育。7.再次洗滌：去除未結(jié)合的第二抗體。8.核染色（如需要）：使用熒光標(biāo)記的DNA染料（如DAPI）進(jìn)行核染色，以便觀察細(xì)胞核位置。9.封片與觀察：將樣本封裝在載玻片上，并使用熒光顯微鏡觀察和分析。每個(gè)步驟都需精確操作，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

在進(jìn)行多色標(biāo)記時(shí)，為解決不同抗體大小、親和力差異導(dǎo)致的共定位難題，確保準(zhǔn)確的信號(hào)疊加，可以采取以下措施：1.優(yōu)化抗體選擇：選擇親和力相近、大小適宜的抗體，以減少因抗體特性差異導(dǎo)致的定位偏差。2.嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)條件控制：確?？贵w孵育時(shí)間、濃度等實(shí)驗(yàn)條件一致，以排除外界因素對(duì)共定位結(jié)果的影響。3.使用熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）技術(shù)：通過(guò)FRET技術(shù)驗(yàn)證兩個(gè)目標(biāo)分子是否真正接近，從而判斷共定位的準(zhǔn)確性。4.圖像后處理分析：利用專業(yè)的圖像處理軟件，對(duì)多色標(biāo)記圖像進(jìn)行精細(xì)調(diào)整，如通道對(duì)齊、信號(hào)增強(qiáng)等，以優(yōu)化共定位效果。5.設(shè)立對(duì)照組：設(shè)置合適的對(duì)照組，如單獨(dú)標(biāo)記某一蛋白的對(duì)照組，有助于驗(yàn)證共定位結(jié)果的可靠性。如何有效減少自發(fā)熒光與光譜重疊，以保證多色成像的準(zhǔn)確性和分辨率？

提高多色免疫熒光實(shí)驗(yàn)信噪比及減少非特異性結(jié)合，需細(xì)致優(yōu)化抗體選擇與實(shí)驗(yàn)條件：1.精選抗體：選用高特異性和親和力的抗體，確保來(lái)源可靠，并預(yù)先驗(yàn)證其適用性，通過(guò)免疫組化等確認(rèn)特異性。2.濃度優(yōu)化：依據(jù)說(shuō)明或預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整抗體稀釋度，采用梯度測(cè)試確定合適濃度，維持足夠信號(hào)同時(shí)減少非特異性。3.孵育條件：嚴(yán)格控制抗體孵育時(shí)間與溫度，確保有效結(jié)合同時(shí)限制非特異性。4.強(qiáng)化洗滌：增加洗滌次數(shù)和使用充足洗滌液，選擇適宜洗滌條件徹底清理多余抗體及染料。5.陰性對(duì)照：實(shí)施陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)監(jiān)控非特異性結(jié)合水平，據(jù)此調(diào)優(yōu)實(shí)驗(yàn)參數(shù)，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。通過(guò)上述措施，系統(tǒng)優(yōu)化抗體標(biāo)記和洗滌步驟，有效提升多色免疫熒光實(shí)驗(yàn)的特異性和信噪比。多色免疫熒光技術(shù)通過(guò)多靶點(diǎn)同步檢測(cè)，增強(qiáng)疾病微環(huán)境分析的深度與廣度。中山TME多色免疫熒光mIHC試劑盒

利用光推動(dòng)熒光蛋白實(shí)現(xiàn)時(shí)序成像，動(dòng)態(tài)追蹤細(xì)胞活動(dòng)軌跡。江門多色免疫熒光掃描

在多色免疫熒光技術(shù)中，不同顏色的熒光標(biāo)記與不同分子或蛋白質(zhì)的結(jié)合主要通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)：1.特異性抗體選擇：首先，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇能夠特異性識(shí)別目標(biāo)蛋白質(zhì)或分子的抗體。這些抗體是高度特異性的，能夠與特定的抗原（即蛋白質(zhì)或分子）發(fā)生結(jié)合。2.熒光標(biāo)記物的偶聯(lián)：隨后，將不同顏色的熒光標(biāo)記物（如熒光染料）偶聯(lián)到抗體上。這一過(guò)程確保每種抗體都被對(duì)應(yīng)的熒光顏色標(biāo)記，從而在后續(xù)的步驟中可以通過(guò)顏色來(lái)區(qū)分不同的抗體。3.抗體與抗原的結(jié)合：在樣本制備完成后，將標(biāo)記了熒光染料的抗體添加到樣本中。這些抗體會(huì)與樣本中的特定蛋白質(zhì)或分子（即抗原）發(fā)生特異性結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。4.熒光信號(hào)的檢測(cè)：使用熒光顯微鏡觀察樣本。由于每種抗體都被標(biāo)記了獨(dú)特的熒光顏色，因此可以通過(guò)熒光顯微鏡同時(shí)檢測(cè)和區(qū)分樣本中的多種不同蛋白質(zhì)或分子。熒光信號(hào)的強(qiáng)度通常與抗原-抗體復(fù)合物的數(shù)量成正比，從而可以定量評(píng)估蛋白質(zhì)或分子的表達(dá)水平。江門多色免疫熒光掃描