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保存和運(yùn)輸免疫組化樣本的關(guān)鍵點(diǎn):1、快速固定(<20分鐘)于適量(樣本體積20倍)固定液中。2、使用適宜固定劑(如10%中性福爾馬林),掌握合適固定時(shí)間(6-24小時(shí))。3、固定后室溫穩(wěn)定至少兩天,冰凍樣本-80℃保存,運(yùn)輸時(shí)用干冰或冰袋維持低溫。4、完整標(biāo)注樣本信息,確保記錄無(wú)誤。5、選平底容器防損。6、定期更換固定液。7、運(yùn)輸時(shí)密封防污染損壞。8、石蠟包埋前完成脫水、透明步驟。9、建議備份樣本。10、遵守相關(guān)法規(guī)和生物安全標(biāo)準(zhǔn)。合理措施確保樣本質(zhì)量與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。免疫組化的價(jià)格是多少?宿遷病理切片免疫組化掃描
免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):1、特異性強(qiáng) 免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高 在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。廣東免疫組化掃描免疫組化對(duì)Ca分期有重要作用。
免疫組織化學(xué)染色方法:1、按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。2、按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。3、按結(jié)合方式可分為抗原一抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶法和親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是常用的方法。
邊緣效應(yīng)在免疫組化實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為組織或細(xì)胞邊緣與中心區(qū)域在染色和標(biāo)記上的差異,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。其主要原因是組織邊緣與玻片粘附不牢和試劑未充分覆蓋,為避免邊緣效應(yīng),可采取以下措施:1、使用APES或多聚賴氨酸處理玻片,增強(qiáng)組織與玻片的粘附性。2、切片應(yīng)盡量?。ú怀^(guò)4微米),減少組織脫落。3、避免使用壞死較多的組織,減少損傷。4、滴加試劑時(shí)確保充分覆蓋組織,超出邊緣2mm,避免邊緣干燥。5、使用組化筆畫圈,將組織圈在中心,距邊緣3-4mm,避免油劑干擾。6、調(diào)整顯微鏡成像參數(shù),確保中心和邊緣信號(hào)平衡。使用數(shù)字成像系統(tǒng)時(shí),可進(jìn)行后處理,如修剪邊緣或調(diào)整亮度和對(duì)比度。如何利用免疫組化技術(shù)進(jìn)行Tumor分級(jí)和分期?
在免疫組化實(shí)驗(yàn)中,孵育和沖洗過(guò)程至關(guān)重要。孵育時(shí),應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間和溫度,如一抗孵育通常1-2小時(shí)(37℃)或過(guò)夜(4℃),確保孵育箱溫度穩(wěn)定。避免移動(dòng)和震動(dòng),保持濕盒濕度適中。記錄孵育參數(shù),如起始時(shí)間、結(jié)束時(shí)間、抗體濃度等。沖洗時(shí),選擇新鮮配制的PBS作為沖洗液,確保pH值和離子濃度與細(xì)胞內(nèi)環(huán)境相近。沖洗要充分,每次3-5分鐘,重復(fù)2-3次,輕輕搖動(dòng)或輕拍切片以促進(jìn)沖洗效果。避免直接沖洗切片,防止切片脫落或損壞??偨Y(jié)來(lái)說(shuō),要嚴(yán)格控制孵育和沖洗過(guò)程,注意環(huán)境條件,選擇合適沖洗液,并充分沖洗。通過(guò)遵循這些建議,可以確保免疫組化實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。同時(shí),記錄實(shí)驗(yàn)參數(shù)和保留記錄,便于后續(xù)分析和比較。免疫組化技術(shù)利用抗體特異性識(shí)別抗原,實(shí)現(xiàn)組織中特定蛋白的定位與定量分析。寧波病理切片免疫組化原理
免疫組化可助力制定更合理的治療方案。宿遷病理切片免疫組化掃描
免疫組化7項(xiàng)檢查的具體內(nèi)容因?qū)嶒?yàn)室和診斷需求而異,但通常涵蓋以下方面:1、ER和PR:診斷的關(guān)鍵標(biāo)志物,陽(yáng)性通常表明患者可能受益于內(nèi)分泌醫(yī)療。2、HER-2(人表皮生長(zhǎng)因子受體-2):重要標(biāo)志物,陽(yáng)性者可能需要靶向醫(yī)療。3、Ki-67:用于評(píng)估多種Tumor的增殖活性,數(shù)值越高,Tumor復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的可能性越大。4、P53:抑Ca基因,突變與多種Tumor的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。5、EGFR(表皮生長(zhǎng)因子受體):在Tumor中表達(dá),過(guò)表達(dá)或突變與Tumor惡性程度和耐藥性相關(guān)。6、CK(細(xì)胞角蛋白):標(biāo)記不同的上皮細(xì)胞類型,用于確定Tumor的組織來(lái)源。7、其他特定Tumor標(biāo)志物:根據(jù)具體Tumor類型和診斷需求而定,如針對(duì)特定類型的Tumor標(biāo)志物。宿遷病理切片免疫組化掃描