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酶標(biāo)儀的發(fā)展歷程 酶標(biāo)儀的前世今生 1966年,美國(guó)的Nakane和Pierce及法國(guó)的Avrameas和Uriel同時(shí)報(bào)道了以新的標(biāo)記物——辣根過(guò)氧化酶(HRP)替代熒光素,定位組織中抗原的酶免疫組織化學(xué)技術(shù)(EIH)。1971年,Engvall和Perlmann在酶免疫組織化學(xué)的基礎(chǔ)上,又發(fā)展出一種酶標(biāo)固相免疫測(cè)定技術(shù),即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),成為繼放射免疫分析技術(shù)、熒光免疫之后的第三大標(biāo)記免疫分析技術(shù)。70年代中期,隨著雜交瘤技術(shù)的發(fā)展,發(fā)明了單克隆抗體制備技術(shù),將其應(yīng)用于酶免疫測(cè)定中,提高了其靈敏度和特異性,使一步法雙抗體夾心法等酶免疫測(cè)定方法相繼出現(xiàn)。 酶免疫分析技術(shù)是將酶催化的放大作用與抗原、抗體特異性反應(yīng)相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗體或抗原后,既不影響抗體或抗原的免疫反應(yīng)特異性,也不改變酶本身的催化活性,在相應(yīng)的反應(yīng)底物參與下,標(biāo)記的酶水解底物或顯色,或使供氫體由無(wú)色的還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩难趸?,其有色產(chǎn)物可以通過(guò)肉眼、分光光度計(jì)或顯微鏡觀察或測(cè)定。全自動(dòng)酶標(biāo)儀的測(cè)試系統(tǒng)可以自動(dòng)檢測(cè)樣品的吸光度,以此判斷樣品的含量、活性、結(jié)構(gòu)等信息。湖北設(shè)備酶標(biāo)儀銷(xiāo)售電話
化學(xué)發(fā)光是檢測(cè)化學(xué)發(fā)光酶免疫的光子信號(hào)或來(lái)自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光,可分為閃光型和輝光型兩種類(lèi)型。輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時(shí)間;閃光型發(fā)光時(shí)間短,變化快,穩(wěn)定性不強(qiáng),需要應(yīng)用自動(dòng)加樣器才可以進(jìn)行?;瘜W(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀用單光子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器 (PMT)計(jì)數(shù),光子數(shù)與樣品中目標(biāo)分析物濃度呈一定比例關(guān)系?;瘜W(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀靈敏度非常高,動(dòng)力學(xué)范圍廣。 多功能酶標(biāo)儀是以上兩種或更多檢測(cè)模塊的集成,通常情況下至少可提供光吸收、熒光這兩種較常見(jiàn)檢測(cè)功能,而一些中高質(zhì)量多功能酶標(biāo)儀還可支持化學(xué)發(fā)光、時(shí)間分辨熒光、熒光偏振、生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移,甚至還可以支持“Western Blot”和“上轉(zhuǎn)換發(fā)光”等檢測(cè)。某些多用途高質(zhì)量型酶標(biāo)儀支持標(biāo)準(zhǔn)1cm立式比色皿插槽,可進(jìn)行熒光強(qiáng)度和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。多功能酶標(biāo)儀功能強(qiáng)大、使用范圍廣、避免了重復(fù)購(gòu)買(mǎi),所以成為了實(shí)驗(yàn)室的較佳之選。河南酶標(biāo)儀使用上海穩(wěn)贏機(jī)電設(shè)備全自動(dòng)酶標(biāo)儀多功能性強(qiáng)。
標(biāo)記的多樣化與多功能酶標(biāo)儀應(yīng)運(yùn)而生 標(biāo)記物的多樣化,是免疫技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步的一個(gè)方面。免疫檢測(cè)標(biāo)記物由本初的放射同位素,發(fā)展為安全無(wú)污染的辣根過(guò)氧化物酶(HRP)和磷酸酯酶,并進(jìn)一步擴(kuò)展到熒光素、稀土元素(目前主要是Eu)、上轉(zhuǎn)換等;底物溶液也對(duì)應(yīng)的由酶催化下產(chǎn)生顏色效應(yīng)的底物發(fā)展為產(chǎn)生光子或熒光信號(hào),獲得更加靈敏和穩(wěn)定的信號(hào)和更寬的線性范圍,并相應(yīng)產(chǎn)生了更多檢測(cè)模式。 多種檢測(cè)模式整合在單臺(tái)儀器上,多功能酶標(biāo)儀就運(yùn)用而生了,可實(shí)現(xiàn)對(duì)吸光度、時(shí)間分辨熒光(TRF)、化學(xué)發(fā)光(Lum)及非標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)熒光偏振(FP) 、熒光強(qiáng)度(FI,F(xiàn)RET)等兩種或多種模式的檢測(cè)。此外,應(yīng)用于分子互作的BRET/NANO-BIT(生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù))、熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(TR-FRET)和ALPHA等,近些年也被應(yīng)用于多功能酶標(biāo)儀中。而且多功能酶標(biāo)儀不限于微孔板檢測(cè),還可內(nèi)置比色皿插槽。因此,酶標(biāo)儀目前已成為一個(gè)廣義的定義。
酶標(biāo)儀的前世今生 酶標(biāo)儀問(wèn)世之初,是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA的常規(guī)檢測(cè)儀器。發(fā)展到如今,凡是與光信號(hào)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)、需要高通量、需要節(jié)省試劑的實(shí)驗(yàn),且可以轉(zhuǎn)移到微孔板中的液體物質(zhì),都可以考慮使用微孔板檢測(cè)儀(酶標(biāo)儀)進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。因此,人們沿用早期“ELISA Plate Reader”的酶標(biāo)儀俗稱(chēng),其實(shí)現(xiàn)在已經(jīng)突破了ELISA的范疇,更常用的英文名稱(chēng)是“Microplate Reader”,譯為“微孔板讀板機(jī)(儀)”。 早期的酶標(biāo)儀本質(zhì)是一臺(tái)分光光度計(jì),用比色法對(duì)96孔微孔板中微量體積液體的吸光值(Absorbances,Abs)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí),光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔板中的待測(cè)樣本,一部分光被樣本吸收,另一部分則透過(guò)樣本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將不同待測(cè)樣本的強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)電信號(hào),再經(jīng)前置放大、對(duì)數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)結(jié)構(gòu)x和y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程。其中,光吸收檢測(cè)技術(shù)原理符合朗伯比爾定律。酶標(biāo)儀不僅可用于酶聯(lián)免疫檢測(cè),還可用于蛋白質(zhì)定量、核酸定量等領(lǐng)域,是一種通用的生物檢測(cè)儀器。
檢測(cè)步驟 1.取固體或液體樣品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混勻3分鐘,靜止10分鐘,過(guò)濾,收集濾液,吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液,混勻。 2.取出綠色的稀釋孔和無(wú)色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個(gè)板架上。 3.吸取200ul酶聯(lián)偶合物加入到綠色的稀釋孔,再吸取100ul標(biāo)樣(0、2、5、20、50ppb),和100ul步驟1的待檢混合樣,混勻3次。 4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無(wú)色的有抗體包被的稀釋孔中,靜止15分鐘。 5.將孔中的液體倒掉,用蒸餾水沖洗每個(gè)孔,將微孔倒置于紙巾上把水吸干。 6. 加入100ul底物,放置5分鐘,顏色變?yōu)樗{(lán)色。 7. 加入100ul終止液,顏色變?yōu)辄S色。 8. 上機(jī)檢測(cè),(酶標(biāo)儀濾鏡450nm,示差濾鏡630nm) 9. 稀釋倍數(shù)f:1 10. 定量限:生奶0.002ug/kg, 11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg,合格, 12. 計(jì)算公式:X= c*f全自動(dòng)酶標(biāo)儀采用先進(jìn)的測(cè)試技術(shù),能夠準(zhǔn)確地測(cè)量樣品的吸光度,從而得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。山東多功能酶標(biāo)儀大全
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酶標(biāo)儀主要分類(lèi)和主要檢測(cè)項(xiàng)目 酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的主要儀器,又稱(chēng)微孔板檢測(cè)器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中。酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專(zhuān)業(yè)儀器,又稱(chēng)微孔板檢測(cè)器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀普遍地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中。湖北設(shè)備酶標(biāo)儀銷(xiāo)售電話