廣州外泌體粒徑檢測

在血液和大多數(shù)體液（如尿液、腦脊液、唾液、胸腹腔積液、羊水和乳汁等）中均可檢測到外泌體。血液外泌體的檢測通常采用EDTA抗凝血分離的血漿，miRNA等一些微小RNA則采用血清樣本。泌尿系統(tǒng)中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌體外膜則可幫助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌體miRNAs更具有應(yīng)用價值。相較于血清中相關(guān)miRNA的水平，腦脊液外泌體中的miR-21可作為膠質(zhì)瘤診斷和預(yù)后的指標，特別對預(yù)測中流復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有價值。唾液樣本在安靜狀態(tài)下主要來源于舌下腺和頜下腺，刺激狀態(tài)下則主要來源于腮腺。外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標記物。廣州外泌體粒徑檢測

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛。廣州外泌體粒徑檢測從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。

Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質(zhì)細胞來源外泌體與胰腺ai細胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)裝載紫杉醇的間充質(zhì)細胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性，采用小鼠未成熟樹突狀細胞所產(chǎn)生外泌體作為藥物載體。同時為實現(xiàn)外泌體運輸?shù)陌邢蛐?，使細胞表達能夠識別乳腺ai細胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b，溶酶體相關(guān)膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法，在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細胞外泌體中載入阿霉素。結(jié)果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織，抑制中流生長且無明顯毒性。

瘤釋放的外泌體可以通過削弱免疫效應(yīng)細胞的反應(yīng)和激發(fā)免疫抑制細胞的擴增，來營造一個免疫抑制的環(huán)境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細胞接受免疫系統(tǒng)的攻擊，從而幫助瘤細胞逃過免疫系統(tǒng)的識別。瘤釋放的外泌體可以引發(fā)炎癥，利用基質(zhì)浸潤細胞的反應(yīng)營造出利于瘤生長的微環(huán)境。研究表明，在過去短短的5年里，對外泌體的研究已經(jīng)取得了比較好的的進展。如今，收集并分析瘤釋放的外泌體已經(jīng)成為液體活檢的一個重要研發(fā)方向。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對改善病癥患者的命運發(fā)揮出舉足輕重的影響。外泌體在組織修復(fù)領(lǐng)域均起著重要的作用，并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。

外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體,并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分,并在100000×g~200000×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認為是外泌體分離的“金標準”,也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結(jié)合0.22μm或0.45μm孔徑濾膜進行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集,其分離效率容易受到加速度、轉(zhuǎn)子類型、旋轉(zhuǎn)半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。外泌體是一種由活細胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。細胞外泌體的主要成分

臨床前研究的證據(jù)表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復(fù)的潛在無細胞治理劑。廣州外泌體粒徑檢測

流式細胞技術(shù)針對外泌體的表面抗原標記物進行檢測，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細胞儀進行檢測時往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強反射，操作耗時又費力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細胞儀(HSFCM)，將可檢測的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實現(xiàn)每分鐘10000個外泌體的檢測，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進行外泌體標志蛋白質(zhì)的定量檢測，目前該儀器已商品化。廣州外泌體粒徑檢測

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