浙江血液外泌體

外泌體在各種疾病的診斷和治理中的應(yīng)用研究火熱。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供了一個(gè)多指標(biāo)的診斷窗口。此外，能夠向病變細(xì)胞輸送功能性物質(zhì)的特性使外泌體有潛力作為基因和藥物遞送的載體。有研究總結(jié)了從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理。外泌體在生物液體中寬泛分布，包括血液、尿液、唾液、胸腹水、腦脊液、膽汁、乳汁以及淚液等，其復(fù)雜的內(nèi)容物被認(rèn)為是疾病診斷的無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)生物標(biāo)志物，具有檢測(cè)包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可以用于對(duì)心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測(cè)。外泌體分析會(huì)引起何種生理作用，這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。浙江血液外泌體

在Rameshwar等的研究中，采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，使外泌體載有anti-miR-9。在進(jìn)行間充質(zhì)細(xì)胞和多形性成角質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞間anti-miR-9傳遞的實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞不僅可以通過(guò)縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊(GJIC)也可以通過(guò)外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細(xì)胞(U87和T98G)對(duì)中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實(shí)現(xiàn)，而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9，顯示出外泌體在運(yùn)載miRNA進(jìn)行基因zhiliao時(shí)的潛力。利用外泌體進(jìn)行GBM的zhiliao不只停留在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)上，也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報(bào)道。海洋生物外泌體攝取外泌體作為小分子的藥物傳遞載體。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而喚醒細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。

科學(xué)家也嘗試?yán)猛饷隗w的壓制發(fā)病機(jī)制功能。例如，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜成纖維細(xì)胞所釋放的外泌體，高濃度集聚誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的TNF-α，可使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎惡化。通過(guò)上述介紹可以知道癥狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有與癥狀進(jìn)展相關(guān)的分子，神經(jīng)細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的分子，因此，通過(guò)壓制或去除這些外泌體，有希望壓制疾病發(fā)生。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴(kuò)大臨床應(yīng)用，有望將外泌體應(yīng)用在各種疾病醫(yī)治上。甚至可嘗試?yán)猛饷隗w將siRNA和抗藥劑等運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)細(xì)胞中。外泌體的提取的方式：色譜法。

為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息，可以通過(guò)電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對(duì)外泌體進(jìn)行表征。通過(guò)電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息，不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同，得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如，在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中，外泌體呈現(xiàn)囊泡獨(dú)有的茶托形，可能由于樣品在固定或染色過(guò)程中極度脫水，導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反，在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形，由于不會(huì)脫水變性，所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外，由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率，也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。海洋生物外泌體攝取

外泌體大小不均的原因可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷，導(dǎo)致流體和固體的總含量不同。浙江血液外泌體

外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對(duì)相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能。作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍，但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多。例如，外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)，給后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了許多障礙?？贵w親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體，無(wú)法分析外泌體具有的生理功能，也是兩種提取方法的問(wèn)題所在。而免疫印跡法（WB）和Elisa檢測(cè)法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測(cè)的一般方法，又存在檢測(cè)時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測(cè)到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。浙江血液外泌體

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