巨噬細胞來源外泌體

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關，同時各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細胞外并傳遞到其他細胞，與病情發(fā)展密切相關。病細胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關的分子，構建適合病細胞生長的微環(huán)境，促進病細胞的發(fā)展。另外，病細胞來源的外泌體上粘著分子的表達形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉移途徑。近，有報告指出脂肪細胞釋放的外泌體對肝臟的遺傳基因表達有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細胞，受病毒傳播的細菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細胞傳播的細菌、寄生蟲的活動。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。巨噬細胞來源外泌體

利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質(zhì)進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一，操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等，內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標志蛋白)或鈣聯(lián)結蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì)，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。北京外泌體鑒定外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體。

外泌體（Exosome）介導瘤細胞的增殖過程。瘤細胞通過與自身微環(huán)境的信息交流促進瘤細胞的增殖，而外泌體（Exosome）可以充當這種信息載體。當細胞中出現(xiàn)基因突變時，外泌體（Exosome）會通過膜融合把這種突變信息傳遞至其他的正常細胞，從而導致原病基因的喚醒、抗凋亡基因的表達，使瘤細胞獲得增殖特性。瘤細胞來源的外泌體（Exosome）還可以通過直接抑制免疫細胞，促進瘤細胞逃避免疫監(jiān)視，為瘤細胞在體內(nèi)生長創(chuàng)造條件。然而，雖然當前外泌體生物學仍然不成熟，但越來越多的興趣和資金投入必將加速外泌體基礎研究進展和臨床轉化。

與正常細胞相比，中流細胞外泌體的分泌量增多，內(nèi)容物也存在明顯差異。由于囊泡結構的保護，中流細胞來源的外泌體內(nèi)攜帶有大量中流細胞來源的活性生物分子，其特點包括:(1)提供具有穩(wěn)定構象的蛋白質(zhì)分子;(2)保持蛋白質(zhì)的生物活性;(3)攜帶其中的生物分子經(jīng)體液運輸至遠端qi官;(4)膜融合的作用方式使得中流細胞來源的外泌體能夠與靶細胞之間進行更有效的信息交流。外泌體介導中流轉移:體外研究和體內(nèi)成像實驗表明惡性中流細胞產(chǎn)生的外泌體可以在全身水平上被同一中流或遠端中流中惡性程度較低的ai細胞攝入，其內(nèi)所包含的與轉移相關的mRNAs進入轉移性較低的細胞后，能夠增強其轉移能力。外泌體提取在短時間（一周之內(nèi)）使用，可以放在4度保存，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。

多項研究表明中流細胞來源的外泌體能夠抑制免疫相關的信號通路、阻礙機體對中流的免疫響應。Chen等研究發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細胞、乳腺ai和肺ai細胞會產(chǎn)生攜帶程序性死亡分子1的配體(programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)的外泌體，此類外泌體在血液中循環(huán)，通過表面PD-L1與T細胞結合，導致T細胞在到達中流細胞之前即受到抑制，達到遠程干擾免疫細胞活性的效果。中流來源的外泌體能夠抑制骨髓來源的抑制性細胞(該細胞是樹突狀細胞(dendriticcells，DCs)、巨噬細胞和(或)粒細胞的前體，具有抑制免疫細胞應答的能力)對中流的免疫監(jiān)督。中流細胞來源的外泌體與巨噬細胞共孵育后，其內(nèi)的miRNA-301a通過下調(diào)抑ai基因PTEN)，激huoPI3Kγ(phosphoinositide3-kinaseγ)信號分子，使巨噬細胞被“馴化”成為能參與抗yan反應、血管生成以及促進中流生長轉移的M2型巨噬細胞。外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。北京外泌體鑒定

建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。巨噬細胞來源外泌體

外泌體起源于多泡體,以細胞管腔內(nèi)囊泡的形式存在.細胞的胞吞形成帶有外源性抗體的內(nèi)體小泡,在高爾基體等細胞器的作用下形成早期核內(nèi)體,早期核內(nèi)體的囊膜內(nèi)陷、突入形成多個小囊泡,并選擇性的接受細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等成分,較終形成晚期核內(nèi)體,晚期核內(nèi)體與細胞膜融合,并將外泌體排出胞外。這是一個連續(xù)而又復雜的過程,從內(nèi)體小泡到成熟外泌體,需要在各細胞器間傳遞并包裝,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神經(jīng)酰胺、膽固醇等。外泌體的排出跟其他胞內(nèi)小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的調(diào)控,敲除細胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌體不能排出,且從高爾基體到晚期核內(nèi)體的囊泡運輸不受影響。巨噬細胞來源外泌體

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