湖北外泌體質(zhì)譜

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專(zhuān)利文獻(xiàn)中介紹，通過(guò)終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來(lái)。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進(jìn)一步純化胎盤(pán)相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證，確定同時(shí)表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤(pán)特異性蛋白分子的胎盤(pán)來(lái)源外泌體所在密度層。外泌體具有異質(zhì)性，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。湖北外泌體質(zhì)譜

所有真核細(xì)胞類(lèi)型包括造血細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和病癥細(xì)胞均可在培養(yǎng)條件下分泌外泌體。體內(nèi)所有體液，包括血液、唾液、腦脊液、腹水，甚至尿液中都可以分離得到外泌體。這些外泌體傳輸多種信號(hào)分子，包括蛋白質(zhì)、信使核糖核酸（mRNA）和非編碼核糖核酸（RNA），其攜帶的分子可以被其他細(xì)胞吸收。因此，外泌體可以將生物信息轉(zhuǎn)移到相鄰細(xì)胞。這種細(xì)胞間通信不只涉及生理功能，還涉及一些疾病的發(fā)病機(jī)理，包括瘤、心血管疾病和神經(jīng)退行性疾病等。安徽外泌體熒光標(biāo)記度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高。

瘤釋放的外泌體可以通過(guò)削弱免疫效應(yīng)細(xì)胞的反應(yīng)和激發(fā)免疫抑制細(xì)胞的擴(kuò)增，來(lái)營(yíng)造一個(gè)免疫抑制的環(huán)境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細(xì)胞接受免疫系統(tǒng)的攻擊，從而幫助瘤細(xì)胞逃過(guò)免疫系統(tǒng)的識(shí)別。瘤釋放的外泌體可以引發(fā)炎癥，利用基質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞的反應(yīng)營(yíng)造出利于瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境。研究表明，在過(guò)去短短的5年里，對(duì)外泌體的研究已經(jīng)取得了比較好的的進(jìn)展。如今，收集并分析瘤釋放的外泌體已經(jīng)成為液體活檢的一個(gè)重要研發(fā)方向。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對(duì)改善病癥患者的命運(yùn)發(fā)揮出舉足輕重的影響。

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應(yīng)用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測(cè)量，但兩種方法也各有不足。動(dòng)態(tài)光散射法中散射光強(qiáng)度依賴(lài)于顆粒質(zhì)量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴(yán)重影響測(cè)量結(jié)果，因此動(dòng)態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動(dòng)態(tài)光散射法所得的結(jié)果強(qiáng)烈依賴(lài)于所應(yīng)用的數(shù)學(xué)算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對(duì)不同粒徑范圍的囊泡進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，為了得到準(zhǔn)確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測(cè)量的顆粒粒徑范圍對(duì)儀器分別校準(zhǔn)，操作繁瑣。受檢測(cè)靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無(wú)法檢測(cè)。除此之外，兩種方法都依賴(lài)光散射和粒子的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。活內(nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。

各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá)，由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞，期望開(kāi)發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。另外在從體液中提取外泌體后，體液可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存，因此外泌體有望成為臨床檢測(cè)的新型疾病生物標(biāo)記。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出，特別是血液中釋放的病細(xì)胞來(lái)源的外泌體，其與正常細(xì)胞來(lái)源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目，并作為癥狀早期診斷技術(shù)，應(yīng)用于與癥狀進(jìn)展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記，髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。湖北外泌體質(zhì)譜

外泌體分析會(huì)引起何種生理作用，這是進(jìn)一步研究的發(fā)展方向。湖北外泌體質(zhì)譜

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛。湖北外泌體質(zhì)譜

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