山東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類(lèi)小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來(lái)越多的研究證實(shí)，外泌體可以通過(guò)細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、肉瘤細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析。外泌體顯示出了在診療各種疾病（如心肌病和神經(jīng)?。┓矫娴臐摿?。山東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評(píng)估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見(jiàn)的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測(cè)電子類(lèi)別，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，捕獲并檢測(cè)散射的電子，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過(guò)樣品，并使用熒光屏進(jìn)行檢測(cè)。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測(cè)外泌體時(shí)對(duì)樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會(huì)對(duì)電鏡結(jié)果造成影響；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜，不適合進(jìn)行大量快速的測(cè)量；而且由于樣本經(jīng)過(guò)了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過(guò)程，對(duì)生物樣本的結(jié)構(gòu)會(huì)造成一定的破壞，從而影響觀察的效果，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量外泌體濃度。植物提取試劑盒廠家外泌體的提取的方式：超速離心法。

外泌體研究背景：胞外囊泡是從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類(lèi)小囊泡，直徑為30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等，存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來(lái)越多的研究證實(shí)，外泌體可以通過(guò)細(xì)胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì)，發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細(xì)胞中呈遞抗原程中、腫細(xì)胞細(xì)胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用。對(duì)外泌體的分析和檢測(cè)可以輔助疾病的早期診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后分析。外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。

超速離心是外泌體提取較常用的方法也被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)，主要是根據(jù)外泌體的沉降系數(shù)、大小和形狀將其分離出來(lái)。首先4℃低速離心（300-500g，10min）去除死細(xì)胞以及細(xì)胞碎片，隨后以較高離心速度(2000xg，10min)去除生物聚合物以及凋亡小體，然后用10000xg,30min離心去除大型囊泡，結(jié)尾以超速離心沉淀外泌體。通過(guò)懸浮以及重復(fù)超速離心去除外泌體沉淀中的非外泌體蛋白。超速離心法具有操作簡(jiǎn)單、不易被分離試劑污染、獲得的外泌體數(shù)量較多等優(yōu)點(diǎn)。但是此方法需要昂貴的超高速離心機(jī)，每次處理的樣本量較小，費(fèi)時(shí)，電鏡鑒定時(shí)還發(fā)現(xiàn)外泌體易聚集成塊，且上清中仍能檢測(cè)到大型囊泡，純度不高，另外高速離心會(huì)損傷外泌體影響下游實(shí)驗(yàn)。外泌體通過(guò)內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）：將其中一種針對(duì)外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測(cè)固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，甚至可以進(jìn)行定量。但是，此方法需要通過(guò)超速離心或超濾對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣，流場(chǎng)-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測(cè)器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類(lèi)，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。福建外泌體攝取

外泌體作為小分子的藥物傳遞載體。山東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

外泌體的基本信息：1、外泌體的大?。和饷隗w的直徑約40-150nm。2、從研究上來(lái)講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。3、外泌體屬于胞外囊泡類(lèi)，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌體的直接比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。5、外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個(gè)，近乎于平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。6、外泌體的細(xì)胞源：人體中幾乎所有類(lèi)型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體。7、外泌體具有異質(zhì)性，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。8、外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中。9、外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體。山東外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)

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