免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術(shù),并努力實現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用。
觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對抗原進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學,由于抗原與抗體特異性結(jié)合,因此通過免疫組化使標記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標本主要為兩大類:組織標本和細胞標本,其中制作組織標本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對照觀察,而且能長期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標本制作方法。 英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南!遼寧小鼠免疫組化怎么樣
什么是免疫組化?免疫組化的原理是什么?
1、定義:用標記的特異性抗體對組織切片或細胞標本中某些化學成分的分布和含量進行組織和細胞原位定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細胞化學(immunocytochemistry)技術(shù)。
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2、原理:根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學顯色原理,組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng),前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學成分,在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。 江蘇靠譜免疫組化要多久免疫組化相關(guān)知識匯總。
免疫組化的DAB顯色時間如何把握?
1、DAB顯色時間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時間,到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗;
2、DAB顯色時間很短(如幾秒或幾十秒)就出現(xiàn)很深的棕褐色,這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長,需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間;
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3、此外,若很短時間就出現(xiàn)背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長封閉時間;
4、DAB顯色時間很長(如超過十幾分鐘)才出現(xiàn)陽性染色,一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短(比較好一抗4度過夜);另一方面就是封閉時間過長。
免疫組化的應(yīng)用領(lǐng)域
免疫組化在生物醫(yī)學研究和臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用。在**學中,免疫組化通常被用于**標志物的檢測,幫助確定**的類型、分級和預(yù)后。例如,免疫組化通過檢測ER、PR和HER2的表達,可以指導(dǎo)乳腺*的治療方案。在神經(jīng)科學中,免疫組化用于研究神經(jīng)元的分布和功能。在免疫學中,免疫組化可以用于檢測炎癥細胞和免疫細胞在組織中的分布和水平。此外,免疫組化實驗技術(shù)還被廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學、病理學和藥物研發(fā)等領(lǐng)域。 動物、細胞的免疫組化、免疫熒光,就找英瀚斯生物!
免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標記的切片均呈陰性,無陽性信號,假陰性結(jié)果不是真實的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當,根據(jù)不同的抗原特點采用不同的修復(fù)方法,大多數(shù)抗體要求熱修復(fù),熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對某些細胞內(nèi)抗原和細胞間質(zhì)抗原需要用酶消化,如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問題:一抗效價降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會導(dǎo)致錯診或漏診,進而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問題的可通過設(shè)立陽性對照,比較兩者染色結(jié)果。若陽性對照有表達,表明試劑和染色體系及實驗步驟均無問題;若陽性對照無表達,則檢測過程中某一試劑或某個步驟存在問題,應(yīng)逐一查找原因。有沒有推薦的免疫組化外包公司?青??孔V免疫組化要多少錢
做免疫組化意味什么?遼寧小鼠免疫組化怎么樣
免疫組化的發(fā)展路程?在臨床病理診斷中,免疫組織化學(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段,從20世紀70年代開始,免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷,對于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響,同時也擴展了人們對于各種疾病及cancer形成過程的認識,提高了病理診斷與研究水平。但是,隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù),必須熟悉各種抗體真陽性反應(yīng)部位,實現(xiàn)實驗室間免疫組化標準化,使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實驗,可以與我們英瀚斯生物進行聯(lián)系。遼寧小鼠免疫組化怎么樣