青海免疫組化可以做什么

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-06-02

英瀚斯生物為您整理免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h,脫蠟至水,用PBS沖洗三次,每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù),中火至沸后斷電,間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次,每次5min。4、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

5、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。

6、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過(guò)夜。

7、PBS洗3次,每次5min。

8、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗,4℃孵育50min。

9、PBS洗3次,每次5min。

10、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后,蒸餾水或自來(lái)水沖洗,蘇木素復(fù)染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來(lái)水沖洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。

12、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精(70-100%)10min一個(gè)梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。 做免疫組化需要多少錢(qián)?青海免疫組化可以做什么

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免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來(lái)越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類(lèi)、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術(shù),并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用。

觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱(chēng)為免疫組織化學(xué),由于抗原與抗體特異性結(jié)合,因此通過(guò)免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類(lèi):組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本,其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對(duì)照觀察,而且能長(zhǎng)期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。 甘肅靠譜免疫組化多少錢(qián)免疫組化方法步驟是什么?

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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色? 

(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來(lái)控制。這是重要的一條。

(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。

(3)內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過(guò)延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色; 

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(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過(guò)延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果; 

(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過(guò)氧化氫濃度等; 

(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要; 

(7)防止標(biāo)本染色過(guò)程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本是什么樣的?

實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類(lèi),前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法,對(duì)于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;還能長(zhǎng)期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法。

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免疫組化臨床應(yīng)用中,可以對(duì)傳染性疾病診斷。應(yīng)用抗病毒、細(xì)菌、zhen菌和寄生蟲(chóng)抗原的特異性抗體進(jìn)行免疫組化染色,可以檢測(cè)和診斷許多傳染性疾病病原微生物,如乙型肝炎病毒(HBV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)、人乳T(mén)狀瘤病毒(HPV)、皰疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HVC)、細(xì)小病毒B19、人禽流行性感冒病毒(AIV)、嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS)等等,由于免疫組化在傳染性疾病診斷中具有及時(shí)性、低風(fēng)險(xiǎn)性、高敏感性、特異性、有效性等特點(diǎn),可以用于(1)用于人類(lèi)新病原微生物的識(shí)別;(2)提供快速的形態(tài)學(xué)診斷,使嚴(yán)重傳染性疾病得以早期醫(yī)療;(3)在無(wú)法取得新鮮組織或尚無(wú)培養(yǎng)方法的情況下,提供診斷并對(duì)發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究和認(rèn)識(shí)。英瀚斯生物專(zhuān)業(yè)做實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),一站式醫(yī)學(xué)科研平臺(tái)。免疫組化結(jié)果怎么看?浙江組織免疫組化

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免疫組化的特點(diǎn):

1)特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí),才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2)敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

3)定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的。

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