免疫組化原理及實(shí)驗(yàn)步驟——實(shí)驗(yàn)外包。眾所周知,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,制備特異性抗體,再用這種抗體(第1抗體)作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,形成抗原 - 一抗 - 二抗復(fù)合物,將抗原放大,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的,因此,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分,在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。免疫組化的樣本保存要求是什么?安徽靠譜免疫組化是什么
什么是免疫組化?免疫組化的原理是什么?
1、定義:用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù)。
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2、原理:根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。 河南細(xì)胞免疫組化注意事項(xiàng)關(guān)于免疫組化,你想知道的都在這里!
免疫組化臨床應(yīng)用對(duì)“未分化”cancer的分類。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細(xì)胞的起源特征不能分類,初步區(qū)分組織學(xué)類型用非特異性抗體,在其基礎(chǔ)上再選用特異性抗體做進(jìn)一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白,有時(shí)淋巴瘤可以表達(dá)上皮膜抗原,一些黑色素瘤表現(xiàn)出角蛋白,這同時(shí)也強(qiáng)調(diào)了在cancer診斷中應(yīng)使用一組抗體而不是單個(gè)抗體。如果您有實(shí)驗(yàn)外包的需求,可以與我們南京英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系,我們也有做免疫組化的服務(wù)!
免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用?
定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢(shì)。相比于其他蛋白檢測(cè)方法,免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高,是定位檢測(cè)分析優(yōu)先方法,尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面:惡性**的診斷與鑒別定性;確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位;對(duì)某類**進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型;軟組織**診斷;為臨床提供治療方案的選擇;近年來,隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價(jià)值受到了普遍的認(rèn)可,其在低分化或未分化**的鑒別診斷時(shí),準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。
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免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術(shù),并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用。
觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué),由于抗原與抗體特異性結(jié)合,因此通過免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本,其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對(duì)照觀察,而且能長期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。 如何做好免疫組化實(shí)驗(yàn)?河北動(dòng)物組織免疫組化是什么
免疫組化技術(shù)的原理、分類和優(yōu)點(diǎn)!安徽靠譜免疫組化是什么
免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹:
英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟:
1、SP三步法
1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。
2)0.3%或3%H2O2去離子水(無色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。
3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘
4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.
5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來源一致。傾去,勿洗。
6)滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。
7)滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
8)PBS沖洗,3分鐘×5次。
9)滴加SP(鏈霉親和素-過氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。
10)PBS沖洗,3分鐘×5次。
11)顯色劑顯色(DAB等)。
12)自來水充分沖洗。
13)可進(jìn)行復(fù)染,脫水,透明。
14)選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?安徽靠譜免疫組化是什么