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根據(jù)本發(fā)明的結(jié)果還提供了與相關(guān)多肽的結(jié)構(gòu)和序列有關(guān)的重要信息，這是以靶向方式產(chǎn)生具有所需修飾特性的其他多肽所必需的。特別地，可以定義所謂的“熱點(diǎn)”，即潛在地適合于通過引入靶向突變來修飾特性的序列區(qū)段。也可以推導(dǎo)出有關(guān)氨基酸序列位置的信息，在該區(qū)域中可以發(fā)生可能對(duì)活性幾乎沒有影響的突變，并且可以將其指定為潛在的“沉默突變”。“的表達(dá)”涵蓋“異源表達(dá)”和“過表達(dá)”，并且涉及的轉(zhuǎn)錄和mrna向蛋白質(zhì)的翻譯。過表達(dá)是指在轉(zhuǎn)細(xì)胞或生物中，以mrna、多肽和/或酶活性水平測(cè)量的產(chǎn)物的產(chǎn)生超過了相似遺傳背景的非轉(zhuǎn)化細(xì)胞或生物中的產(chǎn)生水平。如本文所用，“表達(dá)載體”是指這樣一種分子，其使用分子生物學(xué)方法和重組dna技術(shù)工程化以將外來或外源dna遞送到宿主細(xì)胞中。
從而使兩個(gè)序列共價(jià)連接在一起。啟動(dòng)子序列和待重組表達(dá)的序列之間的距離可以小于200個(gè)堿基對(duì)，或小于100個(gè)堿基對(duì)或小于50個(gè)堿基對(duì)。除啟動(dòng)子和終止子外，還可以提及以下作為其他調(diào)控元件的例子：靶向序列，增強(qiáng)子，聚腺苷酸化信號(hào)，可選擇標(biāo)記，擴(kuò)增信號(hào)，復(fù)制起點(diǎn)等。
所述序列還可以是或部分合成的。不管來源如何，與啟動(dòng)子序列有關(guān)的序列將根據(jù)在結(jié)合到本文實(shí)施方案的多肽后所連接的啟動(dòng)子性質(zhì)而表達(dá)或沉默。相關(guān)在所有時(shí)間或替代地在特定時(shí)間在整個(gè)生物體中或在特定組織、細(xì)胞或細(xì)胞室中可以編碼需要表達(dá)或抑制的蛋白。此種核苷酸序列特別地編碼將所需表型性狀賦予給由其改變或轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞或生物體的蛋白質(zhì)。更特別地，相關(guān)的核苷酸序列導(dǎo)致在細(xì)胞或生物體中產(chǎn)生如本文定義的一種或多種目的產(chǎn)物。特別地，核苷酸序列編碼具有如本文定義的酶活性的多肽。本文如上所述的核苷酸序列可以是“表達(dá)盒”的一部分。
有利地，諸如細(xì)菌、真菌或酵母的微生物被用作宿主生物。屬和種是非常特別優(yōu)選的。組中發(fā)現(xiàn)了其他有利的細(xì)菌。家族的酵母也是合適的宿主?；蛘撸麄€(gè)植物或植物細(xì)胞可以用作天然或重組宿主。取決于宿主生物，根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的生物以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式生長(zhǎng)或培養(yǎng)。培養(yǎng)可以分批、半分批或連續(xù)進(jìn)行。營(yíng)養(yǎng)物可以在發(fā)酵開始時(shí)給予，也可以稍后，半連續(xù)或連續(xù)地提供。這也在下面更詳細(xì)地描述。本發(fā)明進(jìn)一步涉及重組生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明的多肽或其功能性生物學(xué)活性片段的方法，其中培養(yǎng)產(chǎn)生多肽的微生物，可選地通過施加至少一種誘導(dǎo)表達(dá)的誘導(dǎo)劑來誘導(dǎo)多肽的表達(dá)，并從培養(yǎng)物中分離這些多肽。
氮源可以單獨(dú)使用或混合使用?？梢源嬖谟谂囵B(yǎng)基中的無機(jī)鹽化合物包括鈣，鎂，鈉，鈷，鉬，鉀，錳，鋅，銅和鐵的氯化物、磷或硫酸鹽。磷酸、磷酸氫鉀或磷酸氫鉀或相應(yīng)的含鈉鹽可用作磷源?？梢詫Ⅱ蟿┨砑拥脚囵B(yǎng)基中，以將金屬離子保持在溶液中。特別合適的螯合劑包括基苯酚，例如兒茶酚或原兒茶酸酯，或有機(jī)酸，例如檸檬酸。生長(zhǎng)因子和鹽通常源自復(fù)雜培養(yǎng)基的成分，例如酵母提取物，糖蜜，玉米漿等。