云南優(yōu)惠的DTO-40，粗妥爾油（CTO）是硫酸鹽制法制漿廠的副產(chǎn)品。
表達(dá)載體典型地包括正確轉(zhuǎn)錄核苷酸序列所需的序列。編碼區(qū)通常編碼目的蛋白，但是也可以編碼rna，例如反義rna、sirna等。如本文所用，“表達(dá)載體”包括任何線性的或環(huán)狀的重組載體，包括但不限于病毒載體、噬菌體和質(zhì)粒。技術(shù)人員根據(jù)表達(dá)系統(tǒng)能夠選擇適合的載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)載體包括本文實(shí)施方案的，其可操作地連接到至少一個(gè)“調(diào)控序列”，其控制轉(zhuǎn)錄、翻譯、起始和終止，例如轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子、操縱子或增強(qiáng)子，或mrna核糖體結(jié)合位點(diǎn)，并且可選地包括至少一個(gè)選擇標(biāo)記。
為了在合適的宿主生物體中表達(dá)，將重組構(gòu)建體或構(gòu)建體有利地插入到宿主特異性載體中，這使得在宿主中的佳表達(dá)成為可能。本文實(shí)施方案的替代實(shí)施方案提供了一種“改變宿主細(xì)胞中的表達(dá)”的方法。在宿主細(xì)胞或宿主生物體中可以增強(qiáng)或過表達(dá)或誘導(dǎo)本文實(shí)施方案的多核苷酸。本文提供的多核苷酸的表達(dá)的改變還會(huì)產(chǎn)生異位表達(dá)，其是在改變的以及在對照或野生型生物體中的一種不同的表達(dá)模式。
表達(dá)的改變是由本文一個(gè)實(shí)施方案的多肽與外源性或內(nèi)源性調(diào)節(jié)劑的相互作用而發(fā)生的或者是由于多肽的化學(xué)修飾導(dǎo)致的。該術(shù)語還指本文實(shí)施方案的多核苷酸的改變的表達(dá)模式，其被改變至低于檢測水平或者被抑制活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文還提供了編碼本文提供的多肽或變體多肽的分離的、重組的或合成的多核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，多種編碼多肽的序列在單一宿主表達(dá)，特別是在不同啟動(dòng)子的控制下。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多種編碼多肽的序列可以存在于單個(gè)轉(zhuǎn)化載體上，或者可以使用分離的載體并選擇包含兩個(gè)嵌合的轉(zhuǎn)化體同時(shí)進(jìn)行共轉(zhuǎn)化。
類似地，一種或多種多肽編碼可以與其他嵌合一起在單一植物、細(xì)胞、微生物或生物體中表達(dá)。取決于語境，術(shù)語“宿主”可以指野生型宿主或經(jīng)遺傳改變的重組宿主或兩者。原則上，所有的原核或真核生物都可以被認(rèn)為是根據(jù)本發(fā)明的或構(gòu)建體的宿主或重組宿主生物。使用根據(jù)本發(fā)明的載體，可以生產(chǎn)重組宿主，其例如可以用至少一種根據(jù)本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)化，并可以用于生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明的多肽。有利地，將如上所述的根據(jù)本發(fā)明的重組構(gòu)建體引入到合適的宿主系統(tǒng)中并表達(dá)。優(yōu)選地，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的普通克隆和轉(zhuǎn)染方法，例如共沉淀、原生質(zhì)體融合、電穿孔、逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染等，以在各自的表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)所述。
例如q-瓊脂糖色譜，離子交換色譜和疏水色譜，以及其他常規(guī)技術(shù)，例如超濾、結(jié)晶、鹽析、滲析和天然凝膠電泳來純化多肽。為了分離重組蛋白，使用載體系統(tǒng)或寡核苷酸可能是有利的，所述載體系統(tǒng)或寡核苷酸通過限定的核苷酸序列延長cdna，并因此編碼改變的多肽或融合蛋白，其例如用于更容易的純化。